檢測(cè)前準(zhǔn)備工作：

1. 請(qǐng)?zhí)崆?0分鐘從冰箱中取出試劑盒，平衡至室溫。

2. 從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結(jié)晶，屬于正常現(xiàn)象；放置室溫，輕搖均勻，待結(jié)晶溶解后再配置洗滌液。可將20ml濃縮洗滌液用蒸餾水或去離子水稀釋配置成400ml工作濃度的洗滌液，未用完的放回4℃

3.20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。

常見(jiàn)樣本處理及要求：

【血清樣本】：將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置 2 小時(shí)或 4℃過(guò)夜，然后 1000×g 離心 20 分鐘，取上清即可，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

注意事項(xiàng)：收集血液樣本應(yīng)避免溶血，因?yàn)榧t細(xì)胞在溶解時(shí)會(huì)釋放具有過(guò)氧化物酶活性的物質(zhì)，這種情況下，ELISA實(shí)驗(yàn)中將會(huì)出現(xiàn)非特異性顯色反應(yīng)，導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果不準(zhǔn)確，出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果。另外，樣本還應(yīng)避免細(xì)菌污染，因?yàn)榧?xì)菌可能含有內(nèi)源性HRP，也會(huì)導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果不準(zhǔn)確。

【血漿樣本】：用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本，并將標(biāo)本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8℃ 1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

注意事項(xiàng)：檢測(cè)前請(qǐng)仔細(xì)閱讀ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)，查看該試劑盒針對(duì)抗凝劑是否有特殊要求。

【細(xì)胞培養(yǎng)物上清】：請(qǐng)1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

【樣品保存】：樣品收集后若在1周內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)的可保存于4℃，若不能及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次使用量分裝，凍存于-20℃（1個(gè)月內(nèi)檢測(cè)），或-80℃（6個(gè)月內(nèi)檢測(cè)），避免反復(fù)凍融，標(biāo)本溶血會(huì)影響最后檢測(cè)結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè)。

大鼠乳酸(LA)科研ELISA試劑盒 定量檢測(cè)組成：（檢測(cè)范圍請(qǐng)參考說(shuō)明書(shū)）

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大鼠乳酸(LA)科研ELISA試劑盒 定量檢測(cè)操作步驟:

【試劑盒平衡至室溫】：從室溫平衡 20min 后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回 4℃。

【標(biāo)準(zhǔn)品加樣】：設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；

【加樣】：樣本孔先加待測(cè)樣本 10μL，再加稀釋液40μL；空白孔不加。除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體 100μL

【溫育】：用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 60min。

【洗滌】：棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5 次（也可用洗板機(jī)洗板）。

【顯色】：每孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育15min。

【終止、測(cè)定】：每孔加入終止液 50μL，15min 內(nèi)，在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD 值。

常見(jiàn)問(wèn)題解答：

1.     問(wèn)：試劑盒的加樣量是多少?

上海軒澤康生物解答：加樣量10ul。先加40ul稀釋液，再加10ul樣本。

2.     問(wèn)：試劑盒的檢測(cè)范圍可以調(diào)整嗎?

上海軒澤康生物解答：可以調(diào)整。不同的廠家因?yàn)橛玫臉?biāo)準(zhǔn)品不同，設(shè)定的檢測(cè)范圍也有區(qū)別。檢測(cè)范圍設(shè)定是根據(jù)樣本不同樣本實(shí)際含量來(lái)設(shè)定的，而且這個(gè)檢測(cè)范圍盡量滿足比較低的狀態(tài)，比如血清血漿，組織勻漿，細(xì)胞樣本等。

3.     問(wèn)：免費(fèi)代測(cè)，寄樣需要注意什么?

上海軒澤康生物解答：凡是購(gòu)買我司ELISA試劑盒，均可免費(fèi)代測(cè)。寄樣要求：樣本分裝在EP管/離心管/凍存管，標(biāo)好編號(hào)，干冰+泡沫箱運(yùn)輸，快遞優(yōu)先選擇順豐。

4.     問(wèn)：樣本需要寄多少?

上海軒澤康生物解答：血清等液相樣本，根據(jù)代測(cè)指標(biāo)數(shù)量、是否做重復(fù)檢測(cè)而定。比如，測(cè)3個(gè)指標(biāo)，每個(gè)樣本做2次檢測(cè)，每個(gè)樣本實(shí)驗(yàn)需要60ul。為防止運(yùn)輸、實(shí)驗(yàn)過(guò)程中損耗，可以稍微多寄5-10ul。新鮮組織樣本需要郵寄不得少于50mg的量。

5.     問(wèn)：試劑盒可以分次使用嗎?

上海軒澤康生物解答：我司酶標(biāo)板均可以拆開(kāi)使用。未用完的試劑、試劑盒，密封保存于2-8℃冷藏。有效期6個(gè)月。

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