微小RNA-7基因敲減對LPS誘導(dǎo)的腦部炎癥的影響
摘要:為研究微小RNA-7(microRNA-7, miR-7)基因敲減(knock down, KD)對LPS誘導(dǎo)的腦部炎癥的影響并探討其意義,課題組用LPS腹腔注射(2.5mg/kg體質(zhì)量)WT小鼠建立腦部炎性損傷模型;HE染色觀察小鼠腦組織病理學(xué)變化,real-time PCR探針法檢測腦組織中miR-7的表達(dá)變化;進(jìn)一步,用LPS腹腔注射(2.5mg/kg體質(zhì)量)WT小鼠和miR-7KD小鼠;12h后,HE染色觀察小鼠腦組織病理學(xué)變化;real-time PCR檢測腦組織中炎性細(xì)胞因子IL-6、TNF-α和TGF-β的mRNA變化水平;ELISA檢測腦組織中炎性細(xì)胞因子IL-6、TNF-α和TGF-β的變化水平;Western blotting檢測信號通路Akt和p-Akt以及炎性信號通路NF-κB和p-NF-κB的表達(dá)變化。結(jié)果顯示小鼠炎性損傷模型腦組織中,HE示W(wǎng)T小鼠在注射LPS后,腦組織中炎性細(xì)胞浸潤顯著增多且miR-7的表達(dá)水平顯著升高(P〈0.01);HE結(jié)果示miR-7 KD小鼠腦組織中炎性細(xì)胞浸潤較WT小鼠顯著增多;real-time PCR結(jié)果示促炎細(xì)胞因子IL-6(P〈0.01)和TNF-α(P〈0.01)的表達(dá)水平均顯著升高,而抑炎細(xì)胞因子TGF-β(P〈0.01)的表達(dá)水平顯著降低;ELISA結(jié)果顯示,促炎細(xì)胞因子IL-6(P〈0.01)和TNF-α(P〈0.01)的表達(dá)水平均顯著升高,而抑炎細(xì)胞因子TGF-β的表達(dá)水平顯著降低(P〈0.01); Western blotting結(jié)果示miR-7 KD模型小鼠腦組織Akt和p-Akt表達(dá)沒有明顯變化,NF-κB(P〈0.05)和p-NF-κB(P〈0.01)表達(dá)均明顯增加。由此miR-7基因敲減顯著促進(jìn)了腦組織炎性損傷的發(fā)生,與NF-κB信號通路傳遞改變相關(guān),本研究為后續(xù)深入探討miR-7在腦部炎癥相關(guān)疾病的發(fā)生機(jī)制中的作用提供了前期實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
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