建立人α突觸核蛋白A30P突變的帕金森病大鼠模型
摘要：目的 建立人α-突觸核蛋白(α-synuclein,α-SYN)A30P突變型轉基因大鼠的帕金森病(Parkinson’s disease,PD)模型。方法 利用慢病毒系統構建過表達野生型α-SYN載體pLKO-CMV-α-SYN-WT-P2A-GFP及α-SYN A30P突變載體pLKO-CMV-α-SYN-A30P-P2A-GFP,分別轉染293FT細胞,瞬時轉染24 h后WB檢測α-SYN的表達水平。之后經慢病毒包裝、濃縮,利用立體定位技術分別對大鼠中腦黑質致密部注射病毒稀釋液,過表達α-SYN野生型和A30P突變型的慢病毒顆粒。免疫熒光染色檢測α-SYN和酪氨酸羥化酶(tyrosine hydroxylase,TH)的分布情況,并觀察中腦黑質致密部多巴胺能神經元數量的變化。Rotating rod實驗評價注射A30P慢病毒大鼠的行為改變情況。結果 野生型和突變型A30P的基因表達載體在293FT細胞內能夠高表達α-SYN蛋白。TH免疫熒光結果顯示:與病毒稀釋液組相比,過表達α-SYN野生型和A30P突變型大鼠均能導致中腦黑質致密部多巴胺能神經元數量的減少,而α-SYN A30P慢病毒注射組的中腦黑質神經元缺失的更多,具有顯著性差異。對A30P轉基因大鼠腦部神經元缺失部位進行免疫熒光發現,該區域TH染色幾乎呈陰性,α-SYN蛋白出現大量聚集,該結果表明腦部神經元的消失同時伴隨著α-SYN蛋白的聚集及TH表達的劇烈減少,進一步揭示過表達α-SYN A30P可以導致多巴胺能神經元數量的減少和退化。此外,rotating rod實驗結果顯示過表達α-SYN A30P大鼠表現出明顯的進行性運動能力障礙。結論 通過慢病毒系統建立了人α-SYN A30P突變型轉基因大鼠的PD模型,為PD發病機制的研究及藥物開發奠定基礎。
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