作者：姜新東，王強，王彤，孫柏旺

【摘要】 目的：研究氫溴酸后馬托品原位凝膠的眼刺激性和藥效作用。方法：18只家兔被隨機分為兩組，分別進行眼刺激性試驗和藥效學研究。每組再分成氫溴酸后馬托品原位凝膠組、氫溴酸后馬托品滴眼液組和生理鹽水對照組3個亞組，裂隙燈顯微鏡觀察眼局部反應情況，斜視尺測量不同時間點瞳孔直徑。結果：氫溴酸后馬托品原位凝膠多次給藥后，裂隙燈顯微鏡觀察家兔眼角膜無混濁，虹膜和結膜未見紅腫、充血、腫脹等異常現象。組織病理學檢查顯示，家兔眼給藥后，與生理鹽水組相比，給藥組組織病理學改變無明顯差異。藥效學結果顯示，氫溴酸后馬托品原位凝膠散瞳時間長達8 h。結論：氫溴酸后馬托品原位凝膠是安全的，并能夠有效地延長藥物釋放時間。

【關鍵詞】 原位凝膠； 刺激性； 氫溴酸后馬托品； 藥效學

近年來，隨著生物藥劑學的發展和眼部用藥后藥物動力學研究的深入，發現溶液劑存在滯留時間短、生物利用度低等問題［1］，如滴眼劑滴入眼內后，由于眼瞼的眨動和淚液的分泌，只有1%～10%的藥物透過角膜到達眼內發揮作用，需要增加給藥次數來提高生物利用度。而使用眼用制劑時，藥物會通過鼻淚管進入鼻腔和消化道最終被全身吸收，所以簡單通過增加給藥次數來提高生物利用度，容易誘發不良反應和有引發毒性反應的風險。眼膏劑通常以凡士林作為基質制成，油膩感強，使用后視力模糊。眼用凝膠劑是以親水性聚合物為載體，有較好的生物相容性，為半固體狀態，可延長藥物的作用時間，減少給藥次數，但給藥劑量不易控制。

眼用原位凝膠不同于傳統的親水凝膠，它根據體內外不同的生理環境(溫度、離子、pH)［24］發生相轉化，體外以液體形式存在，滴入眼內立刻轉為凝膠。此類劑型有一定新穎性，在貯存期間呈液態，滴入眼內后呈半固體狀態，不僅可解決普通滴眼劑眼內滯留時間短、生物利用度不高的問題，也克服了普通眼用凝膠缺乏良好的鋪展性、劑量不易控制的問題，具有很大的應用和發展前景。

氫溴酸后馬托品為抗膽堿藥，具有阻斷乙酰膽堿的作用，使瞳孔括約肌和睫狀肌麻痹引起散瞳和調節麻痹，比阿托品效力快而弱，散瞳后易恢復，實驗過程的觀察簡單方便。本研究以氫溴酸后馬托品作為模型藥，對氫溴酸后馬托品原位凝膠進行刺激性和藥效學研究。

1 材料與方法

1.1 儀器與試藥

氫溴酸后馬托品原料藥(Acros試劑公司)，氫溴酸后馬托品滴眼液(自制對照品)，結冷膠（藥用級，浙江天偉生化工程公司），丙三醇(分析純，南京化學試劑一廠)，尼泊金乙酯(廣州化學試劑有限公司)，斜視尺（寧波醫用縫針廠），裂隙燈顯微鏡（蘇州六六視覺科技股份有限公司）。

1.2 動物

家兔18只，體重（2.0±0.2）kg，無眼疾，東南大學醫學院動物實驗中心提供。

1.3 方法

1.3.1 氫溴酸后馬托品原位凝膠的制備

1.3.1.1 處方 氫溴酸后馬托品原料藥1.0 g，結冷膠0.5 g，丙三醇2.4 g，尼泊金乙酯0.03 g，加超純水定容至100 ml。

1.3.1.2 制備 精密稱取處方量的結冷膠和尼泊金乙酯溶于約70 ml的超純水中，在90 ℃下攪拌20 min使其溶解，冷卻后加入處方量的氫溴酸后馬托品、甘油，攪拌溶解，用超純水定容至100 ml，然后0.45 μm微孔濾膜過濾即得。另外稱取氫溴酸后馬托品原料藥1.0 g，用超純水配制成100 ml，即為1%氫溴酸后馬托品滴眼液［5］，當作實驗陽性對照。

1.3.2 氫溴酸后馬托品眼用原位凝膠多次給藥對眼刺激性實驗［6］

1.3.2.1 實驗方法 取家兔9只，雌雄兼用，試驗前24 h內對每只動物的雙眼進行檢查，選擇無眼睛刺激癥狀、角膜缺陷和結膜損傷的家兔，隨機分為氫溴酸后馬托品眼用原位凝膠組、氫溴酸后馬托品滴眼液組和生理鹽水組3組。每次于結膜囊內滴入50 μl試液，然后使家兔眼睛被動閉合8～10 s，每日給藥兩次，連續給藥7 d。并于每日給藥前及最后一次給藥后在裂隙燈顯微鏡下觀察眼的局部反應情況，按眼刺激實驗評分標準對角膜、虹膜及結膜分別進行評分，算出平均分值。每只家兔眼刺激反應總積分等于每只家兔眼角膜、虹膜、結膜的刺激反應分值之和。平均分為每次觀察時全部家兔眼刺激分值的平均數。然后按眼刺激反應評價標準，判斷氫溴酸后馬托品原位凝膠的眼刺激性。第7天觀察后處死家兔，取出眼球，做角膜病理切片。

1.3.2.2 眼刺激反應評分標準 依照“中華人民共和國衛生部新藥研究指導原則匯編”中的眼刺激試驗評分標準進行評分。（1）角膜無混濁0分；散在彌漫性混濁，虹膜清晰可見1分；半透明區易分辨，虹膜模糊不清2分；出現灰白色半透明區，虹膜細節不清，瞳孔大小勉強看清3分；角膜不透明，由于混濁，虹膜無法辨認4分。（2）虹膜正常0分；皺褶明顯加深，充血、腫脹，角膜周圍有輕度充血，瞳孔對光似有反應1分；出血，肉眼可見壞死，對光無反應(或出現其中之一反應)2分。（3）結膜：A.瞼結膜、球結膜部位血管正常0分；血管充血呈鮮紅色1分；血管充血呈深紅色，血管不易分辨2分；彌漫性充血呈紫紅色3分。B.結膜無水腫0分；輕微水腫(包括瞬膜)1分；明顯水腫，伴有部分眼瞼外翻2分；水腫至眼瞼近半閉合3分；水腫至眼瞼超過半閉合4分。C.無分泌物0分；少

量分泌物1分；分泌物使眼瞼和睫毛潮濕或粘著2分；分泌物使整個眼區潮濕或粘著3分。總積分16分。

1.3.2.3 眼刺激反應評價標準 0～3分為無刺激性；4～8分為輕度刺激性；9～12分為中度刺激性；13～16分為強度刺激性。

1.3.3 氫溴酸后馬托品原位凝膠藥效學研究

取家兔9只，雌雄兼用，試驗前24 h內對每只動物的雙眼進行檢查，選擇無眼睛刺激癥狀、角膜缺陷和結膜損傷的家兔，隨機分為氫溴酸后馬托品眼用原位凝膠組、氫溴酸后馬托品滴眼液組和生理鹽水組3組。

試驗前測量、記錄各大白兔雙眼瞳孔直徑，然后給藥，每只眼睛給藥50 μl，并記錄時間，分別于給藥后5、15、30、60 min和2、3、4、8、24 h記錄瞳孔直徑。

1.4 統計學處理

采用SPSS 13.0 統計軟件包進行統計處理。

2 結果

2.1 刺激性試驗結果

氫溴酸后馬托品原位凝膠多次給藥后，裂隙燈顯微鏡觀察家兔眼角膜無混濁，虹膜和結膜未見紅腫、充血、腫脹等異常現象。對家兔眼角膜、虹膜、結膜刺激綜合評分均為零，結果表明氫溴酸后馬托品原位凝膠多次給藥對兔眼無刺激性。

家兔角膜刺激試驗組織病理學檢查結果顯示：給藥組家兔眼角膜完整，表面由鱗狀上皮覆蓋，鱗狀上皮無壞死脫落，無潰瘍形成、鱗狀上皮結締組織結構清晰完好，未見炎癥細胞浸潤（見圖1）。家兔眼角膜給藥后，與生理鹽水組相比，給藥組組織病理學改變無明顯差異，提示給藥組對家兔眼角膜無明顯刺激。

2.2 藥效學研究

測量了9只健康家兔給予氫溴酸后馬托品原位凝膠、氫溴酸后馬托品滴眼液和生理鹽水后的瞳孔大小，瞳孔平均大小隨時間的變化曲線如圖2。

由圖2可以看出，氫溴酸后馬托品原位凝膠和滴眼液組給藥2 h左右散瞳效果最大，兩者散瞳效果無明顯統計學差異（P＞0.05）。2 h之后，氫溴酸后馬托品滴眼液組散瞳效果逐漸減弱，4 h時已基本恢復正常，而氫溴酸后馬托品原位凝膠組散瞳效果仍然很好，與氫溴酸后馬托品滴眼液組相比有顯著統計學差異(P＜0.05)。4 h之后氫溴酸后馬托品原位凝膠組散瞳效果逐漸減弱，8 h時接近恢復正常。24 h時所有家兔均瞳孔恢復正常大小。原位凝膠劑型克服了滴眼液的不足，延長了藥物在眼內的滯留時間，提高了生物利用度，實現了很好的緩釋效果。

3 結論

原位凝膠是以溶液狀態給藥后立即在用藥部位發生相變，形成非化學交聯的半固體制劑。原位凝膠滴眼劑以其分劑量準確、使用方便、生物利用度高、滯留時間長、有良好的控制釋藥性能、患者的順應性好而成為眼用制劑研究領域的熱點。本研究以氫溴酸后馬托品為模型藥物，對原位凝膠劑型進行安全性評價，并與滴眼液劑型進行藥效學比較，結果顯示，氫溴酸后馬托品原位凝膠是安全的，對眼睛無刺激性，減少了給藥次數，提高了病人的順應性，而且延長了藥物在眼內的滯留時間，提高了藥物的生物利用度，提示眼用原位凝膠劑具有非常好的應用價值。