家蠅抗菌肽AMPs17蛋白原核表達條件的優化及其抗真菌活性檢測
摘要：目的:優化AMPs17重組蛋白的原核表達條件,分析重組蛋白的抗真菌活性。方法:比較不同的誘導溫度(25℃、28℃、30℃、32℃、34℃)、異丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)誘導濃度(0.025mmol/L、0.05mmol/L、0.1mmol/L、0.3mmol/L、0.5mmol/L、0.8mmol/L、1.0mmol/L)和誘導時間(12h、15h、18h、21h、24h)對AMPs17重組蛋白表達量的影響,篩選AMPs17重組蛋白的最佳表達條件;采用鎳離子金屬螯合劑親和層析柱對重組蛋白進行純化,SDS-PAGE和ImageJ圖像分析系統對表達結果進行分析,Western blot對AMPs17重組蛋白進行鑒定,高效液相色譜分析重組蛋白的純度,微量液體稀釋法及菌落計數法檢測其抗真菌活性。結果:在誘導溫度為32℃、IPTG濃度為0. 05mmol/L的條件下誘導培養15h,AMPs17重組蛋白的表達量最高且最為穩定;HPLC色譜儀分析顯示AMPs17重組蛋白純度可達到90%以上;優化后的AMPs17重組蛋白能有效抑制白色念珠菌的生長。結論:優化了家蠅抗菌肽AMPs17的誘導表達條件,獲得了高表達、穩定且具有抗真菌活性的蛋白質,為后續抗菌機制及應用研究提供一定的實驗基礎。
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