人源化IGF-Ⅰ基因的人工合成、重組與表達
摘要：為了實現人源化胰島素樣生長因子Ⅰ（human insulin-like growth factors-Ⅰ,hIGF-Ⅰ）基因在大腸桿菌中的高效表達,了解IGF-Ⅰ基因結構與功能的關系,探索人工制備的hIGF-Ⅰ在臨床治療疾病上的應用,實驗參照GenBank中人IGF-Ⅰ氨基酸序列并進行密碼子優化,然后人工合成這條基因并將克隆至pUC57載體上.構建重組表達載體pGEX-6P-1-hIGF-Ⅰ,轉化大腸桿菌BL21菌株,進行不同誘導條件的優化,SDS-PAGE電泳確定最佳誘導條件,并利用建立hIGF-Ⅰ的間接ELISA檢測方法分析表達產物活性.結果表明,獲得重組表達載體pGEX-6P-1-hIGF-Ⅰ,并在大腸桿菌中實現與GST蛋白的融合可溶性表達.最佳誘導條件OD600值為0.8、IPTG濃度為0.5 mmol/L,表達蛋白的濃度為2.811 mg/mL,且產物具有抗原活性.說明人工制備的hIGF-Ⅰ與天然的hIGF-Ⅰ生物活性有部分相同,在基礎研究和藥物開發方面可作為替代物進行研究.
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