甘藍型油菜轉錄因子WRKY72的基因克隆、表達分析及互作蛋白鑒定
摘要：WRKY轉錄因子作為植物特有的一類轉錄因子,參與調控生長發育、次級代謝、衰老以及對生物和非生物脅迫的響應等過程。本研究首先利用反轉錄PCR (reverse transcription PCR, RT-PCR)方法從甘藍型油菜(Brassica napus)中克隆了WRKY72的cDNA序列(GenBank No.KC246585),其編碼蛋白含有1個保守的WRKY結構域和1個C2H2型鋅指結構。利用綠色熒光蛋白進行亞細胞定位觀察,結果顯示BnaWRKY72定位于細胞核。雙熒光素酶報告系統檢測發現,BnaWRKY72對W-box元件驅動的螢火蟲熒光素酶報告基因具有轉錄激活活性。通過多種激素、生物和非生物逆境處理,利用qRT-PCR檢測BnaWRKY72表達量變化,發現該基因能夠響應冷害脅迫以及核盤菌(Sclerotinia sclerotiorum)侵染。利用酵母雙雜交和雙分子熒光互補技術,篩選并驗證了BnaWRKY72的多個互作蛋白,包括同亞組的BnaWRKY31、BnaWRKY42及其自身;同時,BnaWRKY72與小分子類泛素修飾蛋白(small ubiquitin-like modifier, SUMO) 3發生互作,提示SUMO化修飾可能參與其活性調節。本研究首次探討了BnaWRKY72分子特性,為深入研究其抗逆功能及相關分子機制提供了參考依據。
注: 保護知識產權,如需閱讀全文請聯系農業生物技術學報雜志社
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