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Vasorin蛋白特異單鏈DNA適配體的篩選與鑒定

李慧; 王瑋; 丁紅梅; 董潔; 黃皚雪; 羅昭鋒; 李潔; 白琛俊; 李少華; 邵寧生 軍事科學(xué)院軍事醫(yī)學(xué)研究院軍事認(rèn)知與腦科學(xué)研究所; 北京100850; 中國(guó)人民武裝警察部隊(duì)后勤學(xué)院生物化學(xué)與分子生物學(xué)教研室; 天津300309; 中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué); 安徽合肥230026

摘要：目的：篩選能特異識(shí)別vasorin（VASN）蛋白的單鏈DNA（ss DNA）適配體并對(duì)其進(jìn)行鑒定。方法：利用SPRSELEX技術(shù)篩選VASN蛋白特異ss DNA適配體,通過基因克隆測(cè)序、MEME在線軟件和RNA structure軟件分析富集文庫(kù)序列并挑選出候選適配體序列,利用EMSA、ELISA、流式細(xì)胞術(shù)對(duì)候選適配體進(jìn)行特異性與親和力鑒定。結(jié)果：經(jīng)過5輪SELEX篩選,獲得了與VASN蛋白特異結(jié)合的ss DNA適配體富集文庫(kù),合成候選適配體,經(jīng)EMSA和ELISA檢測(cè)分析,證實(shí)適配體V4-2能與VASN蛋白特異結(jié)合,而不與無關(guān)對(duì)照牛血清白蛋白結(jié)合,其平衡解離常數(shù)為281.3±103.7 nmol/L;流式細(xì)胞術(shù)證實(shí)V4-2能夠特異識(shí)別高表達(dá)VASN蛋白的Hep G2細(xì)胞。結(jié)論：篩選獲得特異識(shí)別VASN蛋白的ss DNA適配體V4-2。

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