凡納濱對(duì)蝦細(xì)胞色素P450(CYP370C2)基因的克隆與表達(dá)分析
摘要:細(xì)胞色素P450(CYP)酶系在機(jī)體的毒素、污染物和藥物等代謝過(guò)程中發(fā)揮著重要作用,為深入了解對(duì)蝦CYP基因的結(jié)構(gòu)和功能,采用c DNA末端快速克隆技術(shù)得到凡納濱對(duì)蝦Litopenaeus vannamei CYP家族基因CYP370C2的全長(zhǎng)c DNA序列,共1 745 bp,包含1個(gè)1 464 bp的開(kāi)放閱讀框,編碼487個(gè)氨基酸。CYP370C2基因序列中具有CYP蛋白特有的血紅素結(jié)合區(qū)、Ⅰ螺旋保守區(qū)、C螺旋保守區(qū)和K螺旋保守區(qū)。同源性比對(duì)結(jié)果顯示,凡納濱對(duì)蝦CYP370C2基因序列與三疣梭子蟹Portunus trituberculatus的CYP基因相似度最高,為64%。CYP370C2基因在所有檢測(cè)的組織中均有表達(dá),在肝胰腺中的表達(dá)量最高,鰓和腸道次之。在48 h的氨氮脅迫試驗(yàn)中,脅迫24 h后,肝胰腺和鰓中的CYP370C2基因相對(duì)表達(dá)量與對(duì)照組相比均顯著上調(diào),分別在48 h和24 h達(dá)到峰值。脂多糖(LPS)注射后,CYP370C2基因在肝胰腺中的相對(duì)表達(dá)量在3 h開(kāi)始顯著上升,在12 h達(dá)到最大值; CYP370C2基因在鰓中的表達(dá)在LPS注射后的3 h和6 h被顯著抑制,12 h恢復(fù)至對(duì)照組水平,隨后在24 h和48 h顯著上調(diào)。這些實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,CYP370C2基因參與了氨氮脅迫響應(yīng)和LPS刺激響應(yīng),表明CYP370C2基因可能在凡納濱對(duì)蝦抗環(huán)境脅迫和抗病原體的免疫防御過(guò)程中均發(fā)揮重要作用。
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