3-甾酮-9α-羥基化酶基因的表達及其催化合成9α-羥基雄甾-4-烯-3,17-二酮
摘要：研究應用于甾體9α-羥基化的高效催化劑和催化體系是實現甾體藥物9α位羥基高效合成的關鍵。本文中,筆者對來源于分支桿菌（Mycobacterium tuberculosis） H37Rv和紅平紅球菌（Rhodococcus erythropolis） SQ1的3-甾酮-9α-羥基化酶基因（reksh A,mtksh A）進行優化,并對2個基因的催化活性進行檢測。通過構建工程表達菌株,以雄甾-4-烯-3,17-二酮（AD）為底物,對制備9α-羥基雄甾-4-烯-3,17-二酮（9α-OH-AD）的催化反應進行了探索。結果表明：基因序列優化顯著提升了ReKshA和MtKshA蛋白的可溶性表達,其中Re Ksh A具有較好的雄甾-4-烯-3,17-二酮9α位羥基化活性。用TB培養基培養Re Ksh A的工程表達菌株BL21（DE3）-pET28a-rekshA-yh,在30℃、500μmol/L底物濃度、0. 8%（體積分數）乙醇為助溶劑、0. 1 mmol/L IPTG誘導濃度、底物與誘導劑同時加入到工程菌液中的條件下,9α-OH-AD得率達到97. 09%。
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