藏獒犬IFNγ基因的克隆表達(dá)及其生物學(xué)活性測定
摘要：通過RT-PCR技術(shù)從刺激的藏獒犬外周血淋巴細(xì)胞中成功克隆IFNγ全基因,其大小為501bp,編碼167個氨基酸,前23個AA為信號肽,與GenBank上發(fā)表的犬IFNγ（（NM001003174.1）比較,序列的同源性為99.4%。構(gòu)建了原核表達(dá)載體pET-30a-IFNγ,轉(zhuǎn)化BL2L,IPTG誘導(dǎo)后表達(dá)約23Kd的重組蛋白,經(jīng)鎳瓊脂糖凝膠層析柱純化后,純度達(dá)90%以上;利用抑制病毒噬斑法測定重組藏獒犬γ干擾素的生物學(xué)活性,結(jié)果顯示純化的蛋白具有一定的抗病毒活性,本研究結(jié)果為進一步研究犬γ干擾素的抗病毒活性奠定基礎(chǔ)。
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