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大黃魚sox9a/b基因的克隆與表達分析

張夢; 朱陽陽; 李完波; 沈偉良; 吳雄飛; 葉坤; 王志勇 集美大學農業農村部東海海水健康養殖重點實驗室; 福建廈門361021; 寧波市海洋與漁業研究院; 浙江寧波315103; 青島海洋科學與技術國家實驗室; 海洋漁業科學與食物產出過程功能實驗室; 山東青島266071

摘要:為探究sox9基因在大黃魚性別決定與分化過程中的作用,利用RACE方法克隆得到大黃魚sox9a和sox9b 2個基因,采用實時熒光定量PCR(qRT-PCR)分析其在雌雄個體不同組織和不同發育階段的表達規律,并檢測了其在17β-雌二醇處理后的遺傳雄性和17α-甲基睪酮誘導處理后遺傳雌性幼魚中的表達變化。結果顯示,大黃魚sox9a c DNA全長2 442 bp(NCBI登錄號:MH996431),包含476 bp 5′UTR、466 bp 3′UTR、1 500 bp ORF,編碼499個氨基酸。大黃魚sox9b cDNA全長為2 199 bp(NCBI登錄號:MH996432),包含335 bp5′UTR、415 bp 3′UTR、1 449 bp ORF,編碼482個氨基酸。qRT-PCR分析顯示,sox9a基因主要在性腺、眼、腦、肝臟中表達,精巢中的表達量顯著高于卵巢;sox9b在大黃魚各組織中廣泛表達,但以精巢中表達量最高,而卵巢中只有痕量表達。在魚苗性腺發育初期,sox9a/b的表達量都維持在較低水平;隨著魚苗長大,sox9a/b的表達量在84 dph、123 dph 2次達到高峰,隨后開始下降,10 mph后又逐漸上升。17β-雌二醇處理能夠顯著下調遺傳雄性大黃魚sox9a和sox9b基因在性腺中的表達,17α-甲基睪酮處理則顯著上調遺傳雌性大黃魚sox9a和sox9b基因在性腺中的表達。研究表明,sox9a/b基因與大黃魚性別發育和分化過程密切相關,對大黃魚精巢的發育與維持起重要的調控作用,而且兩個基因的功能可能具有一定程度的分化。

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