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青稞幼苗期葉片中SBEⅡa基因的克隆及其表達(dá)分析

付國勇; 張永永; 劉新春; 李東梅; 蔡羽; 時(shí)麗潔; 王丹丹; 馮宗云 四川農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院大麥青稞研究中心; 四川成都611130

摘要：為進(jìn)一步研究淀粉分支酶(Starch branching enzyme,SBE)在青稞葉片淀粉代謝中的作用,以青稞品種喜馬拉雅2號和康青1號為材料,通過同源克隆技術(shù)分離SBEⅡa基因,并對分離得到的SBEⅡa基因進(jìn)行生物信息學(xué)分析,同時(shí)利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)技術(shù)和淀粉分支酶活性測定試劑盒分析了在高溫、低溫和鹽脅迫條件下SBEⅡa基因的表達(dá)情況和SBEⅡa蛋白酶活性的變化情況。結(jié)果表明,從喜馬拉雅2號和康青1號克隆得到的SBEⅡa基因ORF區(qū)為2466bp,編碼821個(gè)氨基酸。生物信息學(xué)分析表明,該基因編碼的蛋白質(zhì)分子量為92.09kDa,預(yù)測等電點(diǎn)(pI)為5.4,是酸性蛋白;該蛋白酶的不穩(wěn)定系數(shù)為38.03,屬于穩(wěn)定蛋白;參試材料與大麥的親緣關(guān)系最近,與細(xì)江蘺的親緣關(guān)系最遠(yuǎn)。qRT-PCR和蛋白酶活性測定結(jié)果表明,SBEⅡa基因在不同環(huán)境下表達(dá)水平和SBEⅡa蛋白酶活性變異具有高度的正相關(guān)性,在不同環(huán)境和不同材料之間沒有明顯差異。

注: 保護(hù)知識產(chǎn)權(quán),如需閱讀全文請聯(lián)系麥類作物學(xué)報(bào)雜志社

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