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加急見(jiàn)刊

HaV01 Pol內(nèi)部半胱氨酸對(duì)其剪接活性的影響

李佳; 孟清 東華大學(xué)生物科學(xué)與技術(shù)研究所; 上海201620

摘要：希望獲得一個(gè)內(nèi)部不含有半胱氨酸的蛋白質(zhì)內(nèi)含子作為標(biāo)記和修飾的工具。通過(guò)定點(diǎn)突變和搭橋PCR技術(shù)對(duì) HaV01 Pol內(nèi)部4個(gè)半胱氨酸Cys進(jìn)行突變和替換，然后通過(guò)Western Blot檢測(cè)對(duì)應(yīng)的蛋白質(zhì)內(nèi)含子活性。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，位于112位的半胱氨酸突變可以影響 HaV01 Pol的剪接活性，其余3個(gè)對(duì)其剪接活性則沒(méi)有任何影響，用甘氨酸Gly和蘇氨酸Thr替換112Cys后，可以挽救 HaV01 Pol的剪接活性。第一次發(fā)現(xiàn)一個(gè)非保守區(qū)的半胱氨酸可以決定蛋白質(zhì)內(nèi)含子的活性。通過(guò)Gly和Thr替換成功獲得了2個(gè)沒(méi)有半胱氨酸的 HaV01 Pol蛋白質(zhì)內(nèi)含子，為 HaV01 Pol進(jìn)一步改造和應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。

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