HaV01 Pol內部半胱氨酸對其剪接活性的影響
摘要：希望獲得一個內部不含有半胱氨酸的蛋白質內含子作為標記和修飾的工具。通過定點突變和搭橋PCR技術對 HaV01 Pol內部4個半胱氨酸Cys進行突變和替換，然后通過Western Blot檢測對應的蛋白質內含子活性。結果發現，位于112位的半胱氨酸突變可以影響 HaV01 Pol的剪接活性，其余3個對其剪接活性則沒有任何影響，用甘氨酸Gly和蘇氨酸Thr替換112Cys后，可以挽救 HaV01 Pol的剪接活性。第一次發現一個非保守區的半胱氨酸可以決定蛋白質內含子的活性。通過Gly和Thr替換成功獲得了2個沒有半胱氨酸的 HaV01 Pol蛋白質內含子，為 HaV01 Pol進一步改造和應用奠定了基礎。
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