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毛細管區(qū)帶電泳-紅色激光誘導(dǎo)熒光檢測磷酸化氨基酸

夏麗君; 郭小峰; 王紅 生物醫(yī)學(xué)分析化學(xué)教育部重點實驗室、武漢大學(xué)化學(xué)與分子科學(xué)學(xué)院; 湖北武漢430072

摘要：以自行設(shè)計合成的1,7-二甲基-3,5-二苯乙烯基-8-苯基-（4′-氧乙酸-N-羥基琥珀酰亞胺酯）-二氟化硼-二吡咯甲烷（DMDSPAB-OSu）為高活性紅色熒光衍生試劑,建立了毛細管區(qū)帶電泳-激光誘導(dǎo)熒光（CZE-LIF）分離檢測磷酸化蘇氨酸、磷酸化絲氨酸和磷酸化酪氨酸的新方法。DMDSPAB-OSu具有量子產(chǎn)率高、光穩(wěn)定性好、熒光不受pH和溶劑影響等優(yōu)勢,且其熒光波長與紅色半導(dǎo)體激光檢測器匹配,可有效減少生物基質(zhì)內(nèi)源性熒光干擾。在0.07 mol·L~（-1）H3BO3-Na2B4O7緩沖溶液（pH=8.5）中,DMDSPAB-OSu與3種磷酸化氨基酸的衍生反應(yīng)室溫下僅需5 min,衍生產(chǎn)物可在17.5min內(nèi)實現(xiàn)基線分離,激光誘導(dǎo)熒光檢測檢出限（S/N=3）為1.5~3.2nmol·L~（-1）,方法用于牛奶酪蛋白樣品檢測,回收率為91.1%~103.8%。

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