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馬氏珠母貝4種殼色選育系RAPD反應(yīng)體系優(yōu)化

陳靜 劉志剛 王偉 劉鈾 楊煥章 廣東海洋大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院 廣東湛江524025 廣東海洋大學(xué)農(nóng)學(xué)院 廣東湛江524088

摘要：旨在篩選出馬氏珠母貝RAPD反應(yīng)的最佳體系，為不同殼色馬氏珠母貝種質(zhì)資源遺傳多樣性和親緣關(guān)系的研究奠定基礎(chǔ)。試驗以4種殼色馬氏珠母貝為材料，采用SDS法進(jìn)行閉殼肌的總DNA提取并對影響RAPD擴(kuò)增效果的因素進(jìn)行優(yōu)化。通過單因素優(yōu)化篩選出最佳的25μL反應(yīng)體系：10×Taqbuffer2.5μL，DNA2.0ng/μL，Mg^2＋3.0mmol/L，引物0.25μmol/L，0.2mmol/LdNTP，Taq酶1.0U；反應(yīng)程序：94℃預(yù)變性5min，然后進(jìn)行40個循環(huán)：94℃變性45s，39℃退火60s，72℃延伸90s，最后72℃延伸10min，4℃終止反應(yīng)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，采用SDS法所提取馬氏珠母貝的DNA達(dá)到RAPD反應(yīng)的要求，篩選體系擴(kuò)增出清晰穩(wěn)定的多態(tài)性條帶，可用于對馬氏珠母貝遺傳育種方面的研究。

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