腐皮鐮孢聚丁二酸丁二酯解聚酶基因優(yōu)化及在畢赤酵母中的表達
摘要:聚丁二酸丁二酯是一種可替代傳統(tǒng)塑料的生物降解塑料,有助于解決白色污染問題,但其在自然界中往往降解緩慢,獲取高效降解微生物或解聚酶是使其快速有效降解的關(guān)鍵。通過構(gòu)建重組畢赤酵母表達體系以實現(xiàn)腐皮鐮孢聚丁二酸丁二酯解聚酶(FSC)的高效表達。根據(jù)畢赤酵母偏好密碼子優(yōu)化FSC的基因密碼子,并導入畢赤酵母X33中實現(xiàn)其重組表達。進一步通過單因素實驗優(yōu)化了菌株的產(chǎn)酶條件。結(jié)果顯示,優(yōu)化后的FSC基因序列中的157個堿基發(fā)生改變,G+C含量由59.6%降低到48.3%,序列同源性為77.34%;構(gòu)建的重組表達載體p PICZα-FSC轉(zhuǎn)入畢赤酵母X33,結(jié)合抗性平板初篩、SDS-PAGE和Western bolt驗證,以及搖瓶發(fā)酵酶活力測定獲得了1株具有較高產(chǎn)酶能力的重組菌株L1;進一步確定其搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)條件:培養(yǎng)基起始p H 6.0,搖床轉(zhuǎn)速220 r/min,甲醇補加量1%,接種量8%,培養(yǎng)時間72 h,培養(yǎng)溫度30℃,此優(yōu)化條件下菌株發(fā)酵液酶活力可達110 U/mL。
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