腐皮鐮孢聚丁二酸丁二酯解聚酶基因優化及在畢赤酵母中的表達
摘要：聚丁二酸丁二酯是一種可替代傳統塑料的生物降解塑料,有助于解決白色污染問題,但其在自然界中往往降解緩慢,獲取高效降解微生物或解聚酶是使其快速有效降解的關鍵。通過構建重組畢赤酵母表達體系以實現腐皮鐮孢聚丁二酸丁二酯解聚酶（FSC）的高效表達。根據畢赤酵母偏好密碼子優化FSC的基因密碼子,并導入畢赤酵母X33中實現其重組表達。進一步通過單因素實驗優化了菌株的產酶條件。結果顯示,優化后的FSC基因序列中的157個堿基發生改變,G＋C含量由59.6%降低到48.3%,序列同源性為77.34%;構建的重組表達載體p PICZα-FSC轉入畢赤酵母X33,結合抗性平板初篩、SDS-PAGE和Western bolt驗證,以及搖瓶發酵酶活力測定獲得了1株具有較高產酶能力的重組菌株L1;進一步確定其搖瓶發酵培養條件：培養基起始p H 6.0,搖床轉速220 r/min,甲醇補加量1%,接種量8%,培養時間72 h,培養溫度30℃,此優化條件下菌株發酵液酶活力可達110 U/mL。
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