miR-451a調控BAP31誘導結直腸癌細胞凋亡
摘要：目的：探討miR-451a及靶蛋白BAP31在結直腸癌中的作用。方法：體外培養HCT116、SW620、SW480、DLD細胞,以Real-time PCR法檢測結直腸癌細胞系中miR-451a和BAP31的相對表達量;通過建立miR-451a不同表達情況的結直腸癌細胞HCT116模型,應用抑制消減雜交方法建立抑制消減文庫,從中篩選miR-451a的調控蛋白,并通過螢光素酶報告基因檢測miR-451a的直接調控靶基因;采用MTT法、流式細胞術以及Hoechst染色法評價miR-451a調控的靶蛋白BAP31對結直腸細胞凋亡的調節作用。結果：在抑制雜交消減文庫中得到了miR-451a可能調控的相關基因,其中在正向文庫中得到BAP31、EEF1A1和CDC20等7個基因,在反向文庫中得到DKK1和PSME1等4個基因。在HCT116、HT29、SW480、SW620和DLD結直腸癌細胞中miR-451a的相對表達量是正常結腸上皮細胞NCM460中的0.32、0.44、0.53、0.43和0.73倍,BAP31在DLD、HT29、SW620和HCT116結直腸癌細胞中的表達量是正常結腸上皮細胞NCM460中的1.85、2.84、2.37和3.71倍。雙螢光素酶報告基因實驗證明,miR-451a可作用于與BAP31開放閱讀框上游177的位點,通過miR-451a作用使海腎熒光素酶的活性降低80.3%。在HCT116細胞和SW620細胞中過表達miR-451a后72h抑制率分別為39.50%和39.50%;沉默BAP31后72h抑制率分別為45.32%和53.56%。過表達miR-451a48h后HCT116凋亡增加13.57%,SW620細胞凋亡率增加13.2%;沉默BAP31 48h后HCT116細胞凋亡增加5.62%,SW620細胞凋亡率增加8.68%。結論：miR-451a在結直腸癌細胞中能夠直接通過調控BAP31誘導細胞的凋亡從而抑制細胞的增殖。
注: 保護知識產權,如需閱讀全文請聯系四川生理科學雜志社
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