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摘要：【目的】旨在研究光滑鱉甲Anatolica polita肽聚糖識別蛋白(peptidoglycan recognition proteins, PGRPs)基因ApPGRP表達(dá)模式及其對下游免疫相關(guān)基因的表達(dá)調(diào)控,以及重組蛋白ApPGRP與細(xì)菌的結(jié)合能力。【方法】構(gòu)建原核表達(dá)載體pET-28a-ApPGRP,轉(zhuǎn)化大腸桿菌Escherichia coli BL21(DE3),誘導(dǎo)表達(dá)并純化重組蛋白His-ApPGRP,分別測定其與金黃色葡萄球菌Staphylococcus aureus和肽聚糖(peptidoglycan, PGN)的結(jié)合能力。金黃色葡萄球菌S.aureus刺激后,利用qRT-PCR檢測光滑鱉甲6齡幼蟲體內(nèi)ApPGRP、抗菌肽基因ApAttacin2和ApAttacin1、防御素基因ApDefensin、絲氨酸蛋白酶基因ApSP和絲氨酸蛋白酶抑制劑基因ApSerpin等免疫相關(guān)基因的表達(dá)水平;采用RNAi技術(shù)沉默光滑鱉甲6齡幼蟲體內(nèi)ApPGRP基因的表達(dá),并利用qRT-PCR分別檢測RNAi處理以及RNAi后再用S.aureus刺激時幼蟲體內(nèi)上述基因的表達(dá)水平變化。【結(jié)果】通過原核表達(dá)獲得了重組蛋白His-ApPGRP,其具有結(jié)合金黃色葡萄球菌和肽聚糖的能力。注射金黃色葡萄球菌后,檢測的光滑鱉甲6齡幼蟲免疫相關(guān)基因(ApSP除外)的表達(dá)都顯著上調(diào);RNAi沉默光滑鱉甲6齡幼蟲ApPGRP后,其他免疫相關(guān)基因表達(dá)量均顯著降低,其響應(yīng)金黃色葡萄球菌刺激后的表達(dá)量也顯著低于對照組。【結(jié)論】這些結(jié)果表明,ApPGRP在光滑鱉甲免疫防御中起著識別外源微生物,激活信號通路并調(diào)控抗菌肽表達(dá)的作用。

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