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光滑鱉甲肽聚糖識別蛋白ApPGRP的表達與功能分析

楊曉霞; 徐鑫; 劉忠淵; 毛新芳 新疆大學生命科學與技術學院; 烏魯木齊830046; 四川輕化工大學; 四川自貢643000

摘要:【目的】旨在研究光滑鱉甲Anatolica polita肽聚糖識別蛋白(peptidoglycan recognition proteins, PGRPs)基因ApPGRP表達模式及其對下游免疫相關基因的表達調控,以及重組蛋白ApPGRP與細菌的結合能力?!痉椒ā繕嫿ㄔ吮磉_載體pET-28a-ApPGRP,轉化大腸桿菌Escherichia coli BL21(DE3),誘導表達并純化重組蛋白His-ApPGRP,分別測定其與金黃色葡萄球菌Staphylococcus aureus和肽聚糖(peptidoglycan, PGN)的結合能力。金黃色葡萄球菌S.aureus刺激后,利用qRT-PCR檢測光滑鱉甲6齡幼蟲體內ApPGRP、抗菌肽基因ApAttacin2和ApAttacin1、防御素基因ApDefensin、絲氨酸蛋白酶基因ApSP和絲氨酸蛋白酶抑制劑基因ApSerpin等免疫相關基因的表達水平;采用RNAi技術沉默光滑鱉甲6齡幼蟲體內ApPGRP基因的表達,并利用qRT-PCR分別檢測RNAi處理以及RNAi后再用S.aureus刺激時幼蟲體內上述基因的表達水平變化?!窘Y果】通過原核表達獲得了重組蛋白His-ApPGRP,其具有結合金黃色葡萄球菌和肽聚糖的能力。注射金黃色葡萄球菌后,檢測的光滑鱉甲6齡幼蟲免疫相關基因(ApSP除外)的表達都顯著上調;RNAi沉默光滑鱉甲6齡幼蟲ApPGRP后,其他免疫相關基因表達量均顯著降低,其響應金黃色葡萄球菌刺激后的表達量也顯著低于對照組。【結論】這些結果表明,ApPGRP在光滑鱉甲免疫防御中起著識別外源微生物,激活信號通路并調控抗菌肽表達的作用。

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