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母源性長鏈非編碼RNA Six2a-OT參與斑馬魚胚胎發(fā)育調(diào)控

景新星; 宋佳坤; 范純新 上海海洋大學海洋生物系統(tǒng)和神經(jīng)科學研究所; 中國上海201306; 海洋動物系統(tǒng)分類與進化上海高校重點實驗室; 中國上海201306; 水產(chǎn)科學部級實驗教學示范中心; 中國上海201306; 水產(chǎn)動物遺傳育種中心上海市協(xié)同創(chuàng)新中心; 中國上海201306

摘要：Six基因家族進化高度保守,在脊椎動物個體發(fā)育中起著重要作用。但目前對其調(diào)控機制尚不完全清楚。在UCSC （The University of California Santa Cruz） Genome Browser的斑馬魚基因組數(shù)據(jù)庫中發(fā)現(xiàn), Six2a-Six3a基因簇周圍存在一條長鏈非編碼RNA——Six2a-OT。首先,利用反轉(zhuǎn)錄PCR （RT-PCR）結(jié)合測序證實了該RNA確實存在。然后,利用熒光半定量PCR （qPCR）和整胚原位雜交（whole-mount in situ hybridization, WISH）確定了其特異性的表達模式：Six2a-OT在卵巢中的表達遠高于精巢;在受精卵和早期原腸胚中高表達,隨后顯著下降;受精后48 h （48 hpf）集中表達于耳囊（otic vesicle）、軀干中線（trunk midline）和鰓弓（branchial archs）。隨后,進一步利用反義嗎啡啉（morpholino）特異性阻斷Six2a-OT剪接,觀察到63%的48 hpf胚胎表現(xiàn)出軀干變短、側(cè)彎,或心包積水,同時Six2a和Six3a的表達顯著下降。以上結(jié)果表明：Six2a-OT作為母源性因子通過調(diào)節(jié)Six2a和Six3a的表達參與斑馬魚胚胎早期發(fā)育。這為揭示Six基因簇的表達調(diào)控機制提供了重要依據(jù)。

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