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樗蠶孵化酶基因的克隆與表達(dá)特征分析

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摘要：樗蠶（Philosamia cynthia cynthia）是重要的野蠶資源。為從分子水平研究樗蠶的孵化機(jī)制,以催青第9天的樗蠶卵為材料提取總RNA并反轉(zhuǎn)錄合成c DNA,根據(jù)鱗翅目昆蟲孵化酶基因的保守序列設(shè)計簡并引物,通過RACE-PCR獲得樗蠶孵化酶基因全長c DNA,命名為Pcc HE（Gen Bank登錄號：MH119084）。Pcc HE基因c DNA全長為964 bp,由5＇-UTR、3＇-UTR和885bp的ORF組成,編碼294個氨基酸;Pcc HE蛋白序列含有孵化酶特征序列鋅指結(jié)合基序和Met-轉(zhuǎn)角基序;基于Pcc HE氨基酸序列與16種動物孵化酶同源氨基酸序列構(gòu)建的系統(tǒng)進(jìn)化分析樹顯示,樗蠶與蓖麻蠶之間的親緣關(guān)系最近。半定量RT-PCR檢測Pcc HE在樗蠶胚胎發(fā)育早期的表達(dá)維持在較低水平,催青第3天小幅度增加,第9天時表達(dá)水平開始大幅上升,至孵化前達(dá)到最高水平;Pcc HE在5齡3 d幼蟲中腸中高水平表達(dá),并且在馬氏管中也有表達(dá),這是首次在昆蟲馬氏管中發(fā)現(xiàn)孵化酶基因的表達(dá)。上述結(jié)果表明,Pcc HE與樗蠶的胚胎發(fā)育和孵化密切相關(guān),還可能參與幼蟲期的食物消化、蛋白質(zhì)代謝等生物學(xué)過程。

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