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融合表達白細胞介素10與卵清蛋白重組腺病毒口服變應原疫苗的構建及鑒定

馬仕坤; 關劍; 王丹; 甄宏楠; 謝喜秀 中國醫學科學院北京協和醫學院北京協和醫院變態(過敏)反應科過敏性疾病精準診療研究北京市重點實驗室; 北京100730; 中國醫學科學院北京協和醫學院北京協和醫院婦產科; 北京100730; 中國醫學科學院北京協和醫學院北京協和醫院放療科; 北京100730; 中國醫學科學院北京協和醫學院腫瘤醫院病理科; 北京100021; 中國科學院過程工程研究所; 北京100190

摘要：目的構建免疫調節因子白細胞介素（IL）-10與模式變應原卵清蛋白（OVA）融合表達的重組腺病毒載體口服疫苗。方法直接合成雞IL-10及OVA的DNA序列后,采用重疊PCR法進行連接。連接序列插入穿梭質粒p HBAd-MCMV的多克隆區,獲得重組穿梭質粒p Ad IL-10-OVA。經測序鑒定后,p Ad IL-10-OVA與腺病毒骨架質粒p HBAd-BHG共轉染293細胞,包裝獲得重組腺病毒Ad IL-10-OVA原代病毒,將原代病毒在293細胞中擴增到合適滴度。采用ELISA法檢測細胞上清液中融合蛋白的表達水平。結果重組穿梭質粒插入目標序列經測序鑒定正確,重組腺病毒載體疫苗r Ad IL-10-OVA在293細胞中成功表達。結論成功構建了融合表達IL-10與OVA的重組腺病毒載體疫苗Ad IL-10-OVA,為后續動物實驗驗證其對變態反應性疾病的防治效應奠定了基礎。

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