重組6型腺相關病毒介導的綠色熒光蛋白在野百合堿誘導肺動脈高壓大鼠肺組織中的表達
摘要：目的探討重組6型腺相關病毒（r AAV6）介導的綠色熒光蛋白Zs Green在野百合堿誘導的動脈型肺動脈高壓（PAH）大鼠中的轉染效果及表達,為進一步利用此病毒載體進行PAH機制研究提供實驗依據。方法將24只雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠隨機分為正常對照組、PAH模型組和PAH病毒組,每組8只。PAH模型組和PAH病毒組大鼠頸背部皮下單次注射野百合堿60 mg/kg建立PAH模型,造模后1d PAH病毒組大鼠氣管內注射100μl含1×1011vg r AAV6-Zs Green液,PAH模型組大鼠氣管內注射等體積PBS,正常對照組大鼠頸背部皮下注射等體積生理鹽水,且氣管內注射等體積PBS。造模3周后各組大鼠稱重,采用右心導管法檢測右室收縮壓（RVSP）和平均肺動脈壓（m PAP）。取大鼠新鮮肺組織制備冰凍切片,采用蘇木精伊紅染色檢查大鼠肺組織病理學改變并計算肺動脈中膜厚度（WT）百分比,采用免疫熒光法觀察大鼠肺組織中Zs Green熒光強度變化。收集游離心臟標本測定右心室肥厚指數（RVHI）。采用Western blot法檢測各組大鼠肺組織中Zs Green蛋白的表達。結果 PAH模型鼠體重明顯低于正常對照組,造模大鼠RVSP、m PAP、RVHI和WT百分比均明顯高于正常對照組大鼠,提示野百合堿誘導PAH大鼠造模成功。熒光顯微鏡下可見PAH病毒組大鼠肺組織中Zs Green平均熒光強度（A值）為33.471±5.147,明顯高于正常對照組的4.581±1.871和PAH模型組的4.167±1.249,差異均有統計學意義（均P〈0.05）,并在肺組織中呈廣泛分布,包括肺血管內中膜。Western blot檢測顯示,正常對照組、PAH模型組和PAH病毒組大鼠肺組織中Zs Green蛋白相對表達量（灰度值）分別為0.072±0.017、0.067±0.019和0.317±0.062,PAH病毒組大鼠組肺組織Zs Green蛋白相對表達量明顯高于正常對照組和PAH模型組,差異有統計學意義（均P〈0.05）。蘇木精伊紅染色顯示,PAH病毒組大鼠肺組織炎性細胞浸
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