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摘要：常規(guī)PCR方法不適宜于實(shí)驗(yàn)條件不足的基層現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)H7N9禽流感病毒,不利于疑似病例的及時(shí)診治。本研究旨在建立一種快速簡(jiǎn)便、高靈敏度、低成本的H7N9禽流感病毒快速核酸檢測(cè)技術(shù)。選用H7N9禽流感病毒血凝素(Hemagglutinin,HA)基因作為靶標(biāo)區(qū)域設(shè)計(jì)引物,采用FITC和Biotin標(biāo)記上下游引物,通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄解旋酶依賴(lài)性等溫?cái)U(kuò)增(Reverse transcription helicase-dependent isothermal amplification,RT-HDA)技術(shù)擴(kuò)增病毒RNA,輔以膠體金免疫層析試紙檢測(cè)核酸擴(kuò)增產(chǎn)物,建立H7N9禽流感病毒等溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)方法。采用H7N9禽流感病毒質(zhì)粒和病毒培養(yǎng)物對(duì)該方法的靈敏性、特異性和重復(fù)性進(jìn)行評(píng)價(jià),結(jié)果顯示:病毒最低檢測(cè)限20個(gè)拷貝數(shù)/μL,與常規(guī)PCR方法相比較無(wú)明顯差異,重復(fù)性試驗(yàn)一致,與其他型別的禽流感、流感病毒無(wú)交叉反應(yīng)。本研究建立的RT-HDA聯(lián)合膠體金免疫層析試紙檢測(cè)H7N9禽病毒檢測(cè)方法具有較好的靈敏度、特異性和重復(fù)性,特別適用于現(xiàn)場(chǎng)條件下檢測(cè)H7N9禽流感病毒快速簡(jiǎn)便的檢測(cè)。

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