淮陽山病毒NSs基因在THP-1細胞中的穩定表達及其對白細胞介素-6的調節作用
摘要：淮陽山病毒（Huaiyangshan virus,HYSV）是一種能引起人類發熱伴血小板減少綜合征的新型布尼亞病毒。NSs是淮陽山病毒的毒力因子,可能在病毒的致病中起重要的作用。本研究從構建好的含HYSV NSs基因的重組質粒pBluntNSs中擴增出NSs基因,然后克隆到慢病毒載體pHAGE-CMV-MCS-IZsGreen中構建重組質粒pHAGE-NSs;利用脂質體將pHAGE-NSs與包裝質粒psPAX2、包膜質粒pMD2.G共轉染293T細胞,在熒光顯微鏡下可見大量綠色熒光,收上清,即慢病毒懸液;將慢病毒懸液感染THP-1細胞后,通過綠色熒光蛋白進行流式分選、Western blot驗證獲得穩定表達NSs蛋白的THP-1細胞。利用人白介素-6ELISA檢測試劑盒檢測NSs蛋白對白介素-6的調節作用,結果表明,NSs蛋白能激活THP-1細胞產生白細胞介素-6。
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