桃果實PpARF1蛋白的原核表達及多克隆抗體制備
摘要：【目的】為了探討轉錄因子ARF1(AuxinResponseFactor)對桃果實發育調控的機制.【方法】以'24號'桃果實為試驗材料,構建桃ARF1基因的原核表達載體pET32a-PpARF1,轉化到BL21(DE3)中誘導表達菌體蛋白,篩選出重組蛋白的最適表達條件,按照最適條件大量搖菌誘導表達蛋白,并進行重組蛋白的純化,最后用純化誘導后的重組蛋白制備多克隆抗體及WB檢測.【結果】SDS-PAGE電泳檢測得到pET32a-PpARF1重組蛋白的位置大約在95.0kD,在37℃,轉速250r/min,IPTG0.10mmol/L,誘導4h,誘導出的蛋白表達量最大.免疫印跡試驗顯示所得抗血清能很好檢測到目的蛋白.【結論】ARF轉錄因子參與生長素調控桃果實發育成熟的過程.
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