棉蚜腺苷三磷酸酶E亞基基因RNAi載體的構建及其抗蚜性分析
摘要：【目的】棉蚜(Aphis gossypii)是棉花主要害蟲之一,嚴重危害棉花的生產。利用靶標昆蟲重要基因的雙鏈RNA進行干涉從而防治農業害蟲是當今發展的1種新技術。通過轉基因的方法,在棉花中表達棉蚜靶標基因的雙鏈RNA(Double stranded RNA,dsRNA),特異性地抑制棉蚜內源基因的表達,從而控制蚜蟲對棉花的危害。【方法】本研究利用棉蚜腺苷三磷酸酶E亞基(Adenosine triphosphatase subunit E,ATPase E)基因,構建其RNA干擾載體,并通過農桿菌介導轉化棉花。PCR技術初步篩查45個獨立轉化植株,對PCR陽性植株進行DNA印跡(Southern blot)分析,確認外源基因插入的拷貝數。同時利用RT-PCR(Reverse transcription polymerase chain reaction)方法檢測dsRNA的表達情況。最后結合網棚和大田抗蚜性鑒定分析轉基因株系的抗蚜效果。【結果】從45個轉基因再生植株中獲得22株陽性轉基因株,其中12株為單拷貝插入。根據農藝性狀和dsRNA表達量分析結果,篩選出4個轉基因株系,分別為CZ1、CZ2、CZ3和CZ4。2年的網棚和大田的蚜蟲抗性鑒定結果表明:轉基因棉花CZ1、CZ2和CZ3具有較高的抗蚜性,2015年和2016年的蚜害減退率分別達70%和60%以上。【結論】利用RNAi技術將蚜蟲腺苷三磷酸酶E亞基基因片段轉化棉花,可以提高棉花的抗蚜性,為棉花抗蚜育種提供了新種質和新方法。
注: 保護知識產權,如需閱讀全文請聯系棉花學報雜志社
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