CPTLincRNA-p21調控PI3K/AKT信號通路逆轉結腸癌細胞伊立替康耐藥性
摘要：背景伊立替康(camptothecin-11,CPT-11)為晚期結腸癌的一線化療用藥,但CPT-11耐藥性限制了CPT-11的化療效果.研究結腸癌CPT-11耐藥的機制,并恢復結腸癌細胞對CPT-11的敏感性,對延長結腸癌患者的生命時間具有十分重要的臨床價值.目的探討長鏈基因間非編碼RNA-p21(long intergenic noncoding RNA-p21,lincRNA-p21)對結腸癌細胞CPT-11耐藥的作用和機制.方法采用結腸癌HCT-8細胞和SW480細胞利用CPT-11持續接觸濃度遞增法分別構建伊立替康耐藥HCT-8/CPT-11細胞和SW480/CPT-11細胞,并利用實時定量聚合酶鏈式反應(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)檢測細胞內lincRNA-p21表達.HCT-8/CPT-11細胞和SW480/CPT-11細胞分別轉染pcDNA-lincRNA-p21或si-lincRNA-p21后,細胞計數試劑盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)實驗檢測CPT-11對細胞活性的影響;蛋白質免疫印跡(Western blot)初步分析了lincRNA-p21對磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(phosphoinositide 3-kinase/protein kinase B,PI3K/AKT)通路是否有調節作用.采用PI3K/AKT通路抑制劑LY294002預處理已轉染si-lincRNA-p21的HCT-8/CPT-11細胞和SW480/CPT-11細胞或采用PI3K/AKT通路激動劑Recilisib預處理已轉染pcDNAlincRNA-p21的HCT-8/CPT-11細胞和SW480/CPT-11細胞,CCK-8實驗檢測CPT-11對細胞活性的影響.結果與親本細胞相比,CPT-11耐藥細胞中lincRNA-p21表達明顯降低.過表達lincRNA-p21抑制HCT-8/CPT-11細胞和SW480/CPT-11細胞對CPT-11耐藥性,而敲低lincRNA-p21增強HCT-8/CPT-11細胞和SW480/CPT-11細胞對CPT-11耐藥性.Western blot結果顯示,lincRNA-p21過表達抑制PI3K/AKT通路活性;而敲低lincRNA-p21增強PI3K/AKT通路活性.LY294002能抑制lincRNA-p21敲低對CPT-11耐藥的促進作用;Recilisib能抑制lincRNA-p21過表達對CPT-11耐藥的抑制作用.結論上調lincRNA-p21能抑制結腸癌細胞CPT-11耐藥性,而下調lincRNA-p21能增強結腸癌細胞CPT-11耐藥性,這種調節作用可能與lincRNA-p21調控PI3K/AKT信號通路活性
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