普通小麥MYB轉錄因子Tamyb59的克隆及表達分析
摘要：為進一步挖掘小麥逆境脅迫響應基因在植物非生物逆境脅迫應答中的作用,探究小麥逆境脅迫響應機制,從前期轉錄組結果中篩選出1個編碼MYB蛋白的基因,暫命名為Tamyb59,通過PCR技術擴增Tamyb59的全長;利用NCBI和DNAMAN軟件進行基因序列比對和保守結構域的分析;利用Expasy和TMHMM等在線軟件進行氨基酸組成、親水系數分析;采用MEGA6.0軟件構建系統進化樹;構建pMDC83-GFP融合表達載體,進行基因表達的亞細胞定位分析。采用qRT-PCR分析了基因在不同非生物脅迫處理過程中不同組織的表達特性,并利用SAS數據處理軟件進行差異顯著性分析。結果表明:該基因含有典型的SANT保守結構域,CDS序列全長為522bp,編碼173個氨基酸,編碼蛋白分子質量為19.7ku,理論等電點為7.61。基因系統進化分析結果表明,Tamyb59與山羊草、粳稻、玉米等9種植物MYB轉錄因子有52.0%~85.6%的同源性,其中與谷子的MYB蛋白同源性最高。亞細胞定位結果顯示,Tamyb59基因編碼蛋白定位在細胞核。利用qRT-PCR分析了基因在不同非生物脅迫處理過程中不同組織的表達特性,組織表達特異性分析顯示,Tamyb59基因在小麥根中的表達量較高,莖、葉和幼穗中表達量較低;PEG和鹽脅迫處理過程中,Tamyb59基因的表達均呈現先上升后下降的趨勢,說明Tamyb59基因對不同非生物脅迫有不同的響應。
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