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普通小麥MYB轉(zhuǎn)錄因子Tamyb59的克隆及表達(dá)分析

張鵬鈺; 劉毓俠; 曹麗茹; 袁珍; 王國瑞; 王同朝; 尹鈞; 衛(wèi)麗 河南農(nóng)業(yè)大學(xué)河南糧食作物協(xié)同創(chuàng)新中心; 河南鄭州450002; 河南農(nóng)業(yè)大學(xué); 河南鄭州450002; 河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院; 河南鄭州450002; 國家小麥工程技術(shù)研究中心; 河南鄭州450002

摘要:為進(jìn)一步挖掘小麥逆境脅迫響應(yīng)基因在植物非生物逆境脅迫應(yīng)答中的作用,探究小麥逆境脅迫響應(yīng)機(jī)制,從前期轉(zhuǎn)錄組結(jié)果中篩選出1個(gè)編碼MYB蛋白的基因,暫命名為Tamyb59,通過PCR技術(shù)擴(kuò)增Tamyb59的全長;利用NCBI和DNAMAN軟件進(jìn)行基因序列比對和保守結(jié)構(gòu)域的分析;利用Expasy和TMHMM等在線軟件進(jìn)行氨基酸組成、親水系數(shù)分析;采用MEGA6.0軟件構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹;構(gòu)建pMDC83-GFP融合表達(dá)載體,進(jìn)行基因表達(dá)的亞細(xì)胞定位分析。采用qRT-PCR分析了基因在不同非生物脅迫處理過程中不同組織的表達(dá)特性,并利用SAS數(shù)據(jù)處理軟件進(jìn)行差異顯著性分析。結(jié)果表明:該基因含有典型的SANT保守結(jié)構(gòu)域,CDS序列全長為522bp,編碼173個(gè)氨基酸,編碼蛋白分子質(zhì)量為19.7ku,理論等電點(diǎn)為7.61。基因系統(tǒng)進(jìn)化分析結(jié)果表明,Tamyb59與山羊草、粳稻、玉米等9種植物MYB轉(zhuǎn)錄因子有52.0%~85.6%的同源性,其中與谷子的MYB蛋白同源性最高。亞細(xì)胞定位結(jié)果顯示,Tamyb59基因編碼蛋白定位在細(xì)胞核。利用qRT-PCR分析了基因在不同非生物脅迫處理過程中不同組織的表達(dá)特性,組織表達(dá)特異性分析顯示,Tamyb59基因在小麥根中的表達(dá)量較高,莖、葉和幼穗中表達(dá)量較低;PEG和鹽脅迫處理過程中,Tamyb59基因的表達(dá)均呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢,說明Tamyb59基因?qū)Σ煌巧锩{迫有不同的響應(yīng)。

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