玉米AGPL2蛋白多克隆抗體制備及時空表達分析
摘要：為探討玉米AGPL2在籽粒發育時期淀粉積累過程中的功能機制,通過AGPL2基因克隆和構建帶有GST標簽的原核表達載體PGEX-6T-1-AGPL2,并利用大腸桿菌誘導表達體系,用0.5mmol/L異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)在28℃條件下誘導表達6h后,GST-AGPL2融合蛋白能夠得到高水平表達,然后利用GST(Glutathione S-transferase)標簽蛋白純化介質進行親和層析純化,能夠得到質量較高的GST-AGPL2融合蛋白;利用純化所得的GST-AGPL2重組蛋白免疫新西蘭大白兔制備了AGPL2多克隆抗體,分離并純化抗血清,然后用rTEV Protease去除抗原GST-AGPL2融合蛋白的GST標簽,并用純化后的AGPL2多克隆抗體進行Western Blot檢測,結果發現,AGPL2多克隆抗體具有較高特異性和靈敏性,可用于檢測納克級抗原蛋白;并利用Western Blot方法研究了AGPL2蛋白在玉米不同組織和不同授粉時期胚乳中的分布和表達模式,結果顯示,AGL2蛋白在玉米不同組織中的表達具有組織特異性,且在胚乳中含量最高。AGPL2蛋白在玉米胚乳不同授粉時期表達量先增加后降低,且在授粉中期達到最大值。其結果與玉米籽粒發育過程中淀粉的積累規律一致,說明AGPL2主要存在于玉米胚乳中,且可能參與淀粉的合成,也說明AGPL2多克隆抗體具有很好的特異性,能夠識別玉米體內的AGPL2抗原。
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