建立體外血腦脊液屏障模型方法學研究
摘要：目的:采用原代分離培養Sprague-Dawley(SD)大鼠腦微血管內皮細胞(brain microvascular endothelial cells,BMECs)和星形膠質細胞(astrocyte,As)建立相對簡單可靠、重復性好、接近在體狀態的體外血腦脊液屏障(blood-cerebrospinal fluid barrier,blood-CSF barrier)模型。方法:原代分離、純化和培養BMECs和As,通過細胞形態學和免疫細胞化學染色方法鑒定原代培養的細胞;通過培養在具有特殊質材和孔徑的Transwell小室上建立體外血腦脊液屏障實驗模型,采用倒置顯微鏡觀察細胞形態結構,經跨內皮電阻值(trans endothelial electrical resistance,TEER)、4h液面試漏實驗、兩種特征性酶檢測、熒光素鈉通透性(sodium fluorescent,Na-FLU)評價模型的屏障功能。結果:原代培養的BMECs具有典型的“鋪路石”樣外觀,Ⅷ因子鑒定細胞純度在95%以上;As有細長突觸,胞質較淺,膠質纖維酸性蛋白(glial fibrillary acidic portein,GFAP)鑒定細胞純度在95%以上。通過測定TEER值共培養模型組顯示高電阻值(378.97±11.38)Ω·cm^2;4h液面試漏試驗陽性;γ-谷氨酰轉肽酶(γ-glutamyltranspeptidase,γ-GT)和堿性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)表達分別為(30.88±2.87)μmol·min^-1·mL^-1和(2.51±0.88)金氏單位·100mL^-1;Na-FLU跨膜滲透系數(2.228±0.85)×10^6cm·s^-1。結論:建立的體外血腦脊液屏障模型在形態學、電阻和通透性方面具備了血腦脊液屏障的基本特性。
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