氧化應激影響肝癌細胞糖異生關鍵基因表達的作用
摘要：目的:研究氧化應激在肝癌細胞(HepG2細胞)中對糖異生關鍵基因G6PC (glucose-6-phosphatase,G-6-pase)和GLUT4 (glucose transport protein 4)的影響,并揭示其潛在的調控機制。方法:利用雙氧水(H2O2)處理肝癌細胞導致其細胞內氧化應激水平升高,然后通過qRT-PCR檢測G6PC基因和GLUT4基因在不同時間和不同濃度藥物處理后的轉錄表達情況,再通過Western Blot技術檢測G6PC和GLUT4在不同時間和不同濃度藥物處理后的蛋白表達變化。最后,通過免疫熒光實驗對比雙氧水處理前后G6PC和GLUT4的蛋白表達情況以及轉錄因子FOXO1(Forkhead box O 1)的蛋白定位情況,從而揭示氧化應激在肝癌細胞中調控糖異生的作用機制。結果:(1) qRT-PCR實驗結果表明G6PC基因和GLUT4基因的轉錄表達與H2O2處理的時間和濃度均呈正相關;(2)Western Blot實驗結果表明G6PC和GLUT4的蛋白表達與H2O2處理的時間和濃度均呈負相關;(3) H2O2處理后,免疫熒光結果顯示G6PC和GLUT4蛋白整體熒光亮度較對照組減弱,但G6PC和GLUT4在核內的熒光亮度較對照組稍強;(4) H2O2處理后,免疫熒光結果顯示轉錄因子FOXO1在核內的熒光亮度較對照組減弱及胞質熒光亮度較對照組增強。結論:氧化應激能夠誘導轉錄因子FOXO1從細胞質轉入細胞核,從而導致HepG2肝癌細胞糖異生基因(G6PC和GLUT4)的轉錄表達升高。
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