作者：翁麗麗，齊放，宋啟印，王淑敏

【摘要】 目的對大口靜灰球進行生藥學研究，建立其質量控制標準。 方法采用性狀鑒別、顯微鑒別的方法;利用高效液相色譜法測定麥角甾醇含量，對大口靜灰球進行生藥學初步研究。結果建立了大口靜灰球的性狀、顯微鑒別方法，制定了麥角甾醇的含量測定方法與指標，其樣品平均加樣回收率為100.48%，RSD為1.26%。結論此實驗建立的大口靜灰球的性狀鑒別、顯微鑒別及含量測定方法操作簡便，專屬性強，可用于大口靜灰球的質量控制。

【關鍵詞】 大口靜灰球; 生藥學; 含量測定

馬勃為常用中藥，具有消腫、止血、解毒等功效，用于咽喉腫痛及各種出血[1] ?！吨袊幍洹?2005年版)規定大馬勃Calvatia gigantea (Batsch ex Pers.)Lloyd.，紫色馬勃Calvatia lilacina (Mont. et Berk.) Lloyd和脫皮馬勃Lasiosphaera fenzlii Reich.為中藥馬勃的來源。全國很多地區也用大口靜灰球 Bovistella sinensis Lloyd.子實體作馬勃入藥。大口靜灰球菌別名叫中國靜灰球，來源于馬勃科靜灰球菌屬。分布地區主要是河北、河南、山東、吉林、江蘇、廣東、陜西、甘肅、西藏和貴州等。有止血、解毒、清肺、消腫、利喉等作用，可治療咳嗽、咽喉腫痛、扁桃體炎、外傷出血。含亮氨酸 、酪氨酸、尿素、麥角甾醇、類脂質、馬勃素及磷酸鈉等。本實驗對大口靜灰球進行生藥學研究。

1 材料與儀器

1.1 藥材 試驗用大口靜灰球干燥子實體Bovistella sinensis Lloyd 購于吉林省仙草藥材公司，麥角甾醇對照品購自中國藥品生物制品檢定所。

1.2 藥品和試劑乙醇、石油醚、水合氯醛(分析純)、甲醇(色譜純)、純凈水、蒸餾水。

1.3 儀器 Agilent 1100高效液相色譜儀(廣州北銳精密儀器有限公司);METTLE TOLEDO型電子天平(瑞士梅特勒-托立多公司);XS-213型生物顯微鏡。

2 方法與結果

2.1 大口靜灰球性狀鑒別子實體陀螺形至近球形，直徑6～12cm。不孕基部小，外包被淺青褐色至淺煙色，薄，粉粒狀，易脫落。內包被膜質，柔軟，淺灰綠色，具光澤，成熟后上部不規則開裂成大口。孢體淺煙色。海綿狀，具彈性[2] (圖1)。圖1 大口靜灰球

2.2 大口靜灰球的顯微鑒別

2.2.1 大口靜灰球臨時裝片的制備將適量大口靜灰球研碎成粉末，取極少量粉末涂于載玻片上，滴加2滴水合氯醛，輕輕蓋上蓋玻片，避免產生氣泡，制成臨時裝片。

2.2.2 大口靜灰球的顯微鑒別[3~5] 將大口靜灰球粉末臨時裝片置于顯微鏡下，觀察，找出大口靜灰球粉末的典型特征。

2.2.3 實驗結果孢子球形，黃褐色 ，光滑或具不明顯小疣，直徑4.5～5.5 μm。具無色透明小柄，長5～12.5 μm。孢絲褐色，稍有分枝，直徑2.5～6 μm。見圖2~3。圖2 孢子(10×40) 圖3 孢絲(10×40)

2.3 高效液相色譜法測定大口靜灰球子實體中麥角甾醇含量

2.3.1 對照品溶液的制備精密稱取麥角甾醇對照品5 mg，置于5 ml量瓶中，加甲醇溶解，定容，即得。

2.3.2 供試品溶液的制備麥角甾醇樣品的制備：精稱大口靜灰球子實體4 g，石油醚(60～90℃)索氏提取6 h，提取物水浴蒸干，乙醇溶解并定容至10 ml，即得樣品液。

2.3.3 色譜條件色譜柱為Diamond OSD(250 mm×4.6 mm，5 μm);流動相為甲醇;檢測波長282 nm;柱溫25℃;理論塔板數按麥角甾醇計不低于3 000。

2.3.4 方法學考察

標準曲線的繪制：精密稱取麥角甾醇對照品適量，加流動相制成1 mg/ml的對照品溶液，即得。進樣量分別為9，12，15，18，21 μl，注入液相色譜儀，以相應含量為橫坐標，峰面積為縱坐標，峰面積分別為9 710.56，13 047，16 370.9，19 749.4，23 081.5，進行線性回歸，得回歸方程為Y=1 114.8X-330.27，r=1，表明其在9～21 μg線性范圍良好精密度實驗：精密稱取麥角甾醇對照品，加甲醇制成1 mg/ml的對照品溶液，精密吸取對照品溶液15 μl，注入高效液相色譜儀，重復5次，記錄峰面積積分值分別16 975，16 472，16 157，16 446，16 429，結果RSD 1.80%，結果表明精密度良好。穩定性實驗：取提取的同一樣品，依照供試品溶液制備方法，于0，2，4，8，12，24，48，72 h，分別測定峰面積，記錄峰面積積分值分別為17 629，17 390，17 748，17 428，17 526，17 236，17 632，17 895。實驗結果表明，樣品溶液在72 h內測定，色譜峰無明顯變化，RSD1.20%，表明樣品在72 h內穩定重復性實驗：取提取的同一樣品溶液5份，平行操作，測定麥角甾醇的含量，峰面積分別為20 832，20 856，20 863，20 888，20 902，計算其RSD為0.13%。表明實驗重復性良好?；厥章蕦嶒灒壕芊Q取已知含量的樣品，分別精密加入麥角甾醇對照品7.0 μg，按供試品溶液的制備方法及上述高效液相色譜條件操作，測定其含量，計算回收率。結果見表1表1 大口靜灰球中麥角甾醇加樣回收率實驗結果樣品中含量m/μg麥角甾醇m/μg測得值m/μg回收率(%)平均值(%)2.3.5 含量測定取大口靜灰球子實體，按“2.3.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.3.3”項下色譜條件進樣測定，計算大口靜灰球提取液中麥角甾醇的含量，結果分別為1.713，1.721，1.709 mg/g，平均值為1.714 mg/g(見圖4)。麥角甾醇在9～21 μg范圍內呈良好的線性關系，加樣平均回收率為100.48%，RSD為1.26%。方法穩定可靠，準確性高，操作簡單。A.對照品; B.樣品

圖4 大口靜灰球HPLC圖

3 小結

通過大口靜灰球粉末顯微鑒別，發現其孢子的特征可作為區別于其他馬勃類藥材(例如大馬勃、脫皮馬勃、紫色馬勃等)的主要鑒別依據，為臨床合理用藥提供依據。

采用高效液相色譜法測定大口靜灰球中子實體中麥角甾醇含量，在流動相為甲醇，檢測波長為282 nm，柱溫為25℃，理論塔板數按麥角甾醇計不低于3 000的條件下，麥角甾醇在9～21 μg范圍內呈良好的線性關系，加樣平均回收率為100.48%，RSD為1.26%。方法穩定可靠，準確性高，操作簡單，可應用于大口靜灰球的質量控制，為馬勃進一步的研究提供了參考[6]。