作者：俞汝佳 呂曉菊 高燕渝 馬曉波 杜蓉

【摘要】 目的 比較不同配比頭孢呋辛/三唑巴坦(cefuroxime/tazobactam，1∶1、2∶1、4∶1)對臨床分離致病菌的體外抗菌活性，為新藥研發提供實驗依據。方法 以平皿二倍稀釋法測定MIC值，nitrocefin紙片法測定產酶株，雙紙片法篩選ESBLs菌株。結果 對本次研究收集的2004年1月～2006年1月共482株致病菌進行MIC測定，其中84.85%的菌株產β內酰胺酶，36.31%產生ESBLs。不同配比的頭孢呋辛/三唑巴坦聯合制劑對革蘭陰性菌的抗菌作用較強，尤其對大腸埃希菌與克雷伯菌屬，頭孢呋辛/三唑巴坦(1∶1)的MIC90值分別從>256和>256μg/ml下降至32和64μg/ml，部分細菌，尤其是產ESBLs菌株的耐藥率明顯下降。頭孢呋辛/三唑巴坦3個配比中以1∶1配比的抗菌作用最強。頭孢哌酮/舒巴坦和哌拉西林/三唑巴坦對革蘭陰性菌具有較好的抗菌活性。結論 頭孢呋辛/三唑巴坦(1∶1)為一強效廣譜殺菌藥物，對產ESBLs菌具有較好的抗菌活性。本次研究中孢呋辛/三唑巴坦1∶1配比的MIC50與MIC90值都低于2∶1和4∶1兩個配比，對產超廣譜β內酰胺酶的大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌的抗菌活性最強。

【關鍵詞】 頭孢呋辛； 三唑巴坦； 革蘭陰性桿菌； 體外抗菌活性

ABSTRACT Objective To study the in vitro activity of cefuroxime combined with tazobactam at various ratios (1∶1， 2∶1， 4∶1) against clinical isolates， in order to provide evidence for the new drug development. Methods MIC were determined by the two fold agar dilution， βlactamase by nitrocefin strip， and ESBLs by double strips. Results MIC of cefuroxime/tazobactam against 482 clinical isolates (84.85% βlactamase positive and 36.31% ESBLs positive) were assayed ， which were isolated between January 2004 to January 2006. The in vitro activity of cefuroxime against Gram negative bacilli was significantly enhanced by various ratios combination with tazobactam， especially to Escherichia coli， Klebsiella spp.. The MIC90 of cefuroxime/tazobactam (1∶1) against E.coli， Klebsiella spp. were decreased form >256μg/ml to 32μg/ml， >256μg/ml to 64μg/ml. Especially to ESBLs positive strains， the resistance rates were obviously decreased. The best antibacterial activity of cefuroxime/tazobactam was achieved in the ratio of (1∶1). The in vitro activity against Gram negative bacilli was significantly enhanced by cefoperazone/shubatan and piperacillin/tazobactam. Conclusion The combination of cefuroxime/tazobactam (1∶1) was a potent bactericidal agent， especially against to ESBLsproducing strains.

KEY WORDS Cefuroxime; Tazobactam; Gram negative bacilli; Antibacterial activities

頭孢呋辛(cefuroxime)為第二代頭孢菌素，臨床應用較廣泛，抗菌譜廣，對革蘭陰性桿菌有較好的抗菌活性。隨著抗菌藥物廣泛應用于臨床，特別是不合理使用及細菌超廣譜酶的出現，細菌耐藥率迅速增加。三唑巴坦(tazobactam)是一種競爭性不可逆的廣譜β內酰胺酶抑制劑，通過抑制酶的活性達到克服細菌耐藥、恢復細菌對β內酰胺類抗生素的敏感性的目的。本研究旨在探討頭孢呋辛與不同配比的三唑巴坦聯合，觀察體外抗菌活性的變化，從而為進一步研究提供實驗依據。

1 材料與方法

1.1 菌株來源

本研究收集四川大學華西醫院實驗醫學科臨床微生物實驗室2004年1月～2006年1月非重復菌株382株；質控菌株大腸埃希菌ATCC25922、大腸埃希菌ATCC35218和肺炎克雷伯菌ATCC700603由四川大學華西醫院感染性疾病中心感染性疾病研究室提供。

1.2 藥品及試劑

(1)藥品 頭孢呋辛，批號A20050906，效價91.36%，深圳制藥廠研制；三唑巴坦，批號040901，效價87.72%，蘇州東瑞制藥有限公司生產；哌拉西林/三唑巴坦(piperacillin/tazobactam)，批號60308304，效價90.7%，珠海聯邦制藥有限公司生產；頭孢哌酮(cefoperazone)，批號312501006，效價90.63%，珠海聯邦制藥有限公司生產；舒巴坦(sulbatam)，批號3133505003，效價91.13%，珠海聯邦制藥有限公司生產。

(2)試劑 MH肉湯、MH培養基由杭州天和微生物試劑公司生產。

1.3 方法與判斷標準

(1)最低抑菌濃度(MIC)測定 采用平皿二倍稀釋法［1］，抗菌藥物測定范圍從256～0.015μg/ml；實驗菌株懸液用API比濁儀比濁，Denley多點接種儀接種，37℃孵育，測定抗菌藥物對各種致病菌的最低抑菌濃度(MIC)。按NCCLS 2006年判斷標準判定細菌的耐藥率。

(2)質控 每株菌株均在試驗前經平板分純，以新鮮菌體進行實驗。每次實驗均采用標準菌株作質控，用不含抗生素的平板做試驗菌株生長對照。

(3)β內酰胺酶測定 采用nitrocefin紙片(cefinase，API公司產品)鑒定β內酰胺酶，紙片顯紅色為β內酰胺酶產酶株。

(4)超廣譜β內酰胺酶(ESBLs)菌株的鑒定 按CLSI 2006年ESBLs判定標準，按KB法制備藥敏平板，涂上待測細菌，貼上頭孢他啶、頭孢噻肟與頭孢他啶/克拉維酸、頭孢噻肟/克拉維酸紙片，置37℃培養過夜，按CLSI2006判斷標準，判定產ESBLS菌株。

2 結果

2.1 革蘭陰性菌最低抑菌濃度測定

頭孢呋辛/三唑巴坦1∶1聯合制劑抗菌活性最強，其對大腸埃希菌、克雷伯菌屬、陰溝腸桿菌、弗氏檸檬酸桿菌的MIC50值比單用頭孢呋辛下降1～5個稀釋度，MIC90值比單藥頭孢呋辛下降1～3個稀釋度，其中大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌的MIC50值從256和128μg/ml分別降至8與4μg/ml，MIC90值從>256和>256μg/ml分別降至32與64μg/ml；檸檬酸桿菌和陰溝腸桿菌的MIC50值從128和256μg/ml分別降至8與16μg/ml，MIC90值從>256和>256μg/ml分別降至128與256μg/ml；不動桿菌的MIC50值從256μg/ml降至32μg/ml，MIC90值從>256μg/ml降至128μg/ml；復合制劑對沙雷菌屬、沙門菌屬等的抗菌活性與單藥差異不明顯，低于頭孢哌酮/舒巴坦及哌拉西林/三唑巴坦；頭孢呋辛和頭孢呋辛加酶抑制劑對流感嗜血桿菌MIC值無明顯差異(Tab.1)。

2.2 350株臨床分離致病菌對實驗藥物耐藥性分析

對納入數超過10株的細菌的耐藥率情況進行了分析。CLSI 2006年標準中頭孢呋辛對腸桿菌科細菌抗菌活性判斷標準為：MIC≤8μg/ml敏感，16μg/ml中介，≥32μg/ml耐藥；中介和耐藥合并計算耐藥率。加入三唑巴坦后，145株大腸埃希菌對頭孢呋辛和3種不同配比的頭孢呋辛/三唑巴坦(1∶1，2∶1，4∶1)的耐藥率由單藥的83.45%，分別下降為53.79%、62.07%、52.41%，對頭孢哌酮/舒巴坦耐藥率為25.52%，對哌拉西林/三唑巴坦耐藥率為7.59%，大腸埃希菌對頭孢呋辛耐藥率與其它5種藥物有顯著性差異(P=0.000)；67株肺炎克雷伯菌對頭孢呋辛和3種不同配比的頭孢呋辛/三唑巴坦(1∶1，2∶1，4∶1)的耐藥率由單藥的79.10%，分別下降為28.36%、47.76%、50.75%，對頭孢哌酮/舒巴坦耐藥率為40.30%，對哌拉西林/三唑巴坦耐藥率為28.36%，肺炎克雷伯菌對頭孢呋辛耐藥率與其它5種藥物有顯著性差異(P<0.001)；在15株弗氏檸檬酸桿菌中，三唑巴坦的加入明顯降低了頭孢呋辛的耐藥率，3種不同配比的頭孢呋辛/三唑巴坦耐藥率由單藥時的80%，均降至40%(P<0.05)；其它細菌的耐藥率也有一定程度的下降，但無統計學差異。對于陰溝腸桿菌與產酸克雷伯菌， 1∶1配比增效作用較明顯， 耐藥率分別由 85.29%與58.33%降至75.00%與25.00%(P>0.05)。對于流感嗜血桿菌，頭孢呋辛仍保有較好的抗菌作用，MIC90值均在敏感范圍內，加入酶抑制劑后，MIC值下降1～2倍。除大腸埃希菌、流感嗜血桿菌(包括產β內酰胺酶菌)、副流感嗜血桿菌、肺炎克雷伯菌、黏膜炎莫拉菌(包括產β內酰胺酶菌)、淋病奈瑟菌(包括產β內酰胺酶菌)外，頭孢呋辛不推薦用于沙雷菌、鮑曼不動桿菌、沙門菌等其它革蘭陰性菌感染(Tab.2)。

2.3 抗菌藥物對產超廣譜β內酰胺酶的大腸埃希菌及克雷伯菌屬的抗菌活性比較

Tab.3顯示頭孢呋辛/三唑巴坦1∶1配比制劑對產超廣譜β內酰胺酶大腸埃希菌的抗菌活性較好，MIC50從>256μg/ml下降至8μg/ml，MIC90從>256μg/ml下降至32μg/ml；耐藥性從100%(114/114)下降至24.56%(28/114)；對肺炎克雷伯菌的MIC50> 256μg/ml下降至8μg/ml，MIC90從>256μg/ml下降至64μg/ml；耐藥性從88.68%(47/53)下降至24.53%(13/53)。

2.4 細菌產β內酰胺酶檢測

382株細菌中，84.85%的細菌產β內酰胺酶，36.31%的細菌產ESBLs。

3 討論

頭孢呋辛為第二代頭孢菌素，自20世紀70年代以后在臨床上獲得廣泛應用，隨著細菌超廣譜酶的增多，革蘭陰性菌對頭孢呋辛的耐藥率開始呈上升趨勢。2003年我國醫院和社區獲得性感染革蘭陰性桿菌耐藥性監測研究顯示大腸埃希菌對頭孢呋辛的耐藥率為28.5%，肺炎克雷伯菌為27.8%［2］；2004年上海地區細菌耐藥性監測研究顯示大腸埃希菌對頭孢呋辛的耐藥率為45.7%，肺炎克雷伯菌為53.2%，腸桿菌屬細菌為57.1%［3］；2005年中國CHINET細菌耐藥性監測結果表明大腸埃希菌對頭孢呋辛的耐藥率為53%，肺炎克雷伯菌為50%，腸桿菌屬細菌為61%［4］，呈逐年上升趨勢。

克服細菌耐藥性手段之一是β內酰胺酶抑制劑與β內酰胺酶類合用。三唑巴坦為一種新的β內酰胺酶抑制劑，屬半合成青霉烷砜類衍生物，抑酶作用強于舒巴坦，與克拉維酸相似或稍強，但穩定性強于克拉維酸［5］。本研究采用頭孢呋辛與不同配比三唑巴坦聯合，結果顯示頭孢呋辛/三唑巴坦1∶1聯合制劑抗菌活性最強，對大腸埃希菌、克雷伯菌屬、陰溝腸桿菌、弗氏檸檬酸桿菌的MIC50值比單用頭孢呋辛下降1～5個稀釋度，MIC90值比單藥頭孢呋辛下降1～3個稀釋度。

頭孢呋辛/三唑巴坦(1∶1)配比制劑對產ESBLs大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌的抗菌活性較好，對大腸埃希菌的MIC50從>256μg/ml下降至8μg/ml，MIC90從>256μg/ml下降至32μg/ml；耐藥性從100%(114/114)下降至24.56%(28/114)；對肺炎克雷伯菌的MIC50從>256μg/ml下降至8μg/ml，MIC90從>256μg/ml下降至64μg/ml；耐藥性從88.68%(47/53)下降至24.53%(13/53)；頭孢呋辛/三唑巴坦(2∶1)及頭孢呋辛/三唑巴坦(4∶1)對大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌的抗菌活性相似，略低于頭孢呋辛/三唑巴坦(1∶1)，與文獻報道相似［6］。

145株大腸埃希菌對頭孢呋辛和3種不同配比的頭孢呋辛/三唑巴坦(1∶1，2∶1，4∶1)的耐藥率由單藥的83.45%，分別下降為53.79%、62.07%、52.41%，大腸埃希菌對頭孢呋辛耐藥率與其它5種藥物有顯著性差異(P=0.000)；67株肺炎克雷伯菌對頭孢呋辛和3種不同配比的頭孢呋辛/三唑巴坦(1∶1，2∶1，4∶1)的耐藥率由單藥的79.10%，分別下降為28.36%、47.76%、50.75%，肺炎克雷伯菌對頭孢呋辛耐藥率與其它5種藥物有顯著性差異(P<0.001)；在15株弗氏檸檬酸桿菌中，三唑巴坦的加入明顯降低了頭孢呋辛的耐藥率，3種不同配比的頭孢呋辛/三唑巴坦耐藥率由單藥時的80%，均降至40%(P<0.05)；對于陰溝腸桿菌與產酸克雷伯菌，1∶1配比增效作用較明顯，耐藥率分別由85.29%與58.33%降至75.00%與25.00%(P>0.05)。

本研究中采用的頭孢呋辛/三唑巴坦3個配比中，頭孢呋辛/三唑巴坦1∶1配比的MIC50與MIC90值都低于2∶1，4∶1兩個配比，對產超廣譜β內酰胺酶的大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌的抗菌活性最強。

【參考文獻】 ［1］ 張卓然. 臨床微生物學和微生物檢驗［M］. 北京：人民衛生出版社，2003：35～40. ［2］ 李家泰，齊慧敏，王進，等. 我國醫院和社區獲得性感染革蘭陰性桿菌耐藥性監測研究［J］. 中華醫學雜志，2003，83(12)：1035～1045. ［3］ 朱德妹，汪復，張嬰元. 2004上海地區細菌耐藥性監測［J］. 中國抗感染與化療雜志，2005，5(4)：195～2005. ［4］ 汪復. 2005年中國CHINET細菌耐藥性監測結果［J］. 中國感染與化療雜志，2006，6(5)：289～295. ［5］ 張潤平. β內酰胺酶抑制劑β他唑巴坦的研究［J］. 山東醫藥工業，2001，20(6)：22～23. ［6］ 劉健，鐘巍，李耘，等. 不同配比頭孢呋新與他唑巴坦的體外抗菌活性［J］. 中國臨床藥理雜志，2006，22(1)：25～30.