血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體KDR基因胞外段1—3區(qū)基因轉(zhuǎn)染抑制氧誘導(dǎo)小鼠視網(wǎng)膜新生血管的研究
摘要:目的評(píng)價(jià)脂質(zhì)體介導(dǎo)的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體KDR基因胞外段1-3區(qū)(KDRn3)基因轉(zhuǎn)染抑制氧誘導(dǎo)的視網(wǎng)膜新生血管的效果。方法選1周齡C57Bl/6N小鼠置于氧濃度為75%±2%的氧箱中5d。回到正常環(huán)境中誘導(dǎo)視網(wǎng)膜新生血管模型。在小鼠離開(kāi)氧箱的當(dāng)日,向轉(zhuǎn)染組小鼠玻璃體腔注射脂質(zhì)體pEGFP—N1/KDRn3復(fù)合物1μl;脂質(zhì)體對(duì)照組注射等量脂質(zhì)體;空白對(duì)照組小鼠注射等量PBS。回到正常環(huán)境中后5d,采用視網(wǎng)膜鋪片及視網(wǎng)膜冰凍切片在激光共聚焦顯微鏡下觀察綠色熒光蛋白在視網(wǎng)膜的表達(dá);采用熒光標(biāo)記的右旋糖酐血管灌注下視網(wǎng)膜鋪片方法觀察視網(wǎng)膜新生血管的分布并測(cè)量無(wú)灌注區(qū)面積;組織學(xué)切片觀察比較突破視網(wǎng)膜內(nèi)界膜的血管內(nèi)皮細(xì)胞數(shù)量。多組比較采用方差分析,有統(tǒng)計(jì)意義后進(jìn)行兩兩比較的叮檢驗(yàn)。結(jié)果轉(zhuǎn)染組視網(wǎng)膜鋪片見(jiàn)視網(wǎng)膜局部散在點(diǎn)狀綠色熒光信號(hào),空白對(duì)照組與脂質(zhì)體對(duì)照組未見(jiàn)綠色熒光信號(hào);視網(wǎng)膜冰凍切片見(jiàn)轉(zhuǎn)染組視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層、內(nèi)核層部分細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)見(jiàn)綠色熒光表達(dá),空白對(duì)照組與脂質(zhì)體對(duì)照組視網(wǎng)膜各層未見(jiàn)綠色熒光表達(dá);視網(wǎng)膜鋪片觀察可見(jiàn)空白對(duì)照組與脂質(zhì)體對(duì)照組在無(wú)灌注區(qū)邊緣均可見(jiàn)新生血管芽及熒光滲漏,轉(zhuǎn)染組見(jiàn)新生血管芽明顯減少,生后第17天A、B、C3組新生血管模型小鼠各組視網(wǎng)膜無(wú)灌注區(qū)面積分別為(1.33±0.49)、(2.75±0.70)、(2.12±0.35)mm^2,組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=17.61,P〈0.01)。正常對(duì)照組及A、B、C組視網(wǎng)膜表面突破內(nèi)界膜的血管內(nèi)皮細(xì)胞核計(jì)數(shù)分別為0.20±0.51、13.58±2.48、23.05±3.40及21.70±2.89,組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=1085.25,P〈0.05)。結(jié)論pEGFP—N1/KDRn3基因轉(zhuǎn)染可不同程度抑制氧誘導(dǎo)C37B1/6J小鼠視網(wǎng)膜新生血管的生長(zhǎng)。
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