CBM融合位置對AuMan5A酶學性質的影響
摘要：為探討碳水化合物結合結構域(CBM)不同融合位置對Aspergillus usamii 5家族β-甘露聚糖酶AuMan5A酶學性質的影響,將Thermotoga maritima 27家族CBM分別融合至其C和N末端,構建出融合酶基因Auman5A-cbm27和cbm27-Auman5A。將Auman5A和融合酶基因分別在Pichia pastoris GS115中表達,分析比較表達產物AuMan5A、AuMan5A-CBM27和CBM27-AuMan5A的酶學性質。結果表明:AuMan5A、AuMan5A-CBM27和CBM27-AuMan5A的最適溫度Topt分別為70、70℃和60℃;其中AuMan5A-CBM27在68℃及以下保溫1 h殘余酶活均大于85%,與原酶相比,其熱穩定性提高了約8℃,而CBM27-AuMan5A在58℃及以下保持穩定,與原酶相比,降低了2℃。3種酶的最適pH均為4.0;AuMan5A在pH值2.5~7.5范圍內保持穩定,2種融合酶在pH 2.0~9.0內均能保持穩定。與AuMan5A相比,AuMan5A-CBM27和CBM27-AuMan5A對角豆膠的Km分別降低了45.0%和26.3%。通過比較3種酶的酶學性質,證實CBM不同融合位置對AuMan5A酶學性質具有重要影響。
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