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JWA蛋白時間分辨熒光免疫層析檢測方法的建立

孫康俊; 王曉穎; 徐瑞彤; 李愛萍; 周建偉 南京醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院; 南京211166; 江蘇省人民醫(yī)院全科醫(yī)學(xué)科; 南京210036

摘要：目的:建立時間分辨熒光免疫層析法檢測JWA蛋白的體系,并對該法進行評價。方法:運用EDC(1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽)-NHS(N-羥基琥珀酰亞胺)活化時間分辨熒光微球,活化的時間分辨熒光微球按100μg Ab∶1 mg微球標(biāo)記JWA單克隆抗體7C3;將熒光標(biāo)記的抗體運用于免疫層析檢測。結(jié)果:時間分辨熒光微球成功標(biāo)記JWA單克隆抗體,熒光標(biāo)記的7C3可以準確識別JWA多肽;測量范圍可從20 ng·mL-1至1500 ng·mL-1,線性范圍可達100 ng·mL-1~1000 ng·mL-1,回收率在95%以上,高、中、低濃度的重復(fù)性檢測離散度(CV)均小于10%,加速穩(wěn)定性亦較好,同時可以檢測出胃癌細胞中的JWA蛋白。結(jié)論:本研究建立的時間分辨免疫熒光層析法測定JWA蛋白,各項分析性能良好,且便捷準確、快速經(jīng)濟,為檢測JWA蛋白提供了一種高效的新途徑。

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