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摘要：目的探討中華眼鏡蛇膜毒素12(MT-12)對膀胱癌細(xì)胞的增殖、凋亡及自噬的影響。方法①采用CCK-8法檢測不同濃度(0.10、0.25和0.50μg/ml)的MT-12處理膀胱癌RT4、T24細(xì)胞0、24、48、72、96和120 h后,對膀胱癌RT4、T24細(xì)胞增殖能力的影響;②采用流式細(xì)胞術(shù)檢測MT-12處理膀胱癌RT4、T24細(xì)胞6及24 h后,對膀胱癌RT4、T24細(xì)胞凋亡的影響,主要觀察細(xì)胞凋亡率的改變;③Pan-Caspase抑制劑和MT-12處理膀胱癌細(xì)胞后通過MTT法檢測細(xì)胞活力;④通過GFP-LC3轉(zhuǎn)染,觀察自噬小體形成,通過Western blotting檢測自噬標(biāo)志物的表達(dá)情況。結(jié)果 CCK-8檢測結(jié)果顯示,不同濃度的MT-12處理膀胱癌RT4、T24細(xì)胞0、24、48、72、96和120 h后,MT-12能抑制膀胱癌RT4、T24的細(xì)胞增殖。流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡的結(jié)果顯示,MT-12處理膀胱癌RT4、T24細(xì)胞6及24 h后,實驗組可以增加凋亡細(xì)胞的比例。Pan-Caspase抑制劑V-ZAD-FMK對2株膀胱癌細(xì)胞系進(jìn)行處理后,MT-12并未完全失去對膀胱癌的抑制效果。Western blotting和GFP-LC3轉(zhuǎn)染檢測結(jié)果顯示,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值增大,GFP-LC3轉(zhuǎn)染結(jié)果自噬體(綠色熒光點)增多。結(jié)論 MT-12以濃度-時間依賴的方式抑制膀胱癌RT4、T24細(xì)胞的增殖能力,并誘導(dǎo)其調(diào)亡;MT-12能夠引起細(xì)胞的自噬,并且自噬性的死亡可能發(fā)生在MT-12對膀胱癌細(xì)胞的抑制作用過程中。

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