pYr-Lvsh-CAPNS1-shRNA真核表達干擾載體構(gòu)建與鑒定
摘要：目的利用RNA干擾技術(shù)構(gòu)建pYr-Lvsh-CAPNS1-shRNA載體,并在Hela細胞中鑒定。方法針對目的基因人的CAPNS1基因(NM_001749),設(shè)計shRNA序列,以pYr-Lvsh為載體,構(gòu)建pYr-Lvsh-CAPNS1-shRNA載體;干擾載體轉(zhuǎn)染Hela細胞,利用熒光定量PCR檢測CAPNS1mRNA表達情況;熒光分光光度檢測calpain活性;Western-blot檢測相關(guān)蛋白含量。結(jié)果結(jié)果發(fā)現(xiàn),載體酶切及測序結(jié)果顯示pYr-Lvsh-CAPNS1-shRNA載體構(gòu)建成功;qPCR顯示與對照組相比,shRNA組CAPNS1表達受到抑制,CAPNS1-sh的干擾效率為50.30%;calpain活性檢測顯示shRNA組calpain活性下降并且CAPNS1、calpain1和calpain2蛋白含量下降。結(jié)論結(jié)果表明pYr-Lvsh-CAPNS1-shRNA載體成功構(gòu)建,并在Hela細胞中有效干擾CAPNS1表達。
注: 保護知識產(chǎn)權(quán),如需閱讀全文請聯(lián)系貴州醫(yī)藥雜志社
相關(guān)推薦
更多
學(xué)臨床研究.jpg)
學(xué).jpg)
.jpg)
藥.jpg)
.jpg)
于我們.jpeg)