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pYr-Lvsh-CAPNS1-shRNA真核表達(dá)干擾載體構(gòu)建與鑒定

朱家佳; 龍鼎新 南華大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院; 湖南衡陽421001

摘要：目的利用RNA干擾技術(shù)構(gòu)建pYr-Lvsh-CAPNS1-shRNA載體,并在Hela細(xì)胞中鑒定。方法針對目的基因人的CAPNS1基因(NM_001749),設(shè)計shRNA序列,以pYr-Lvsh為載體,構(gòu)建pYr-Lvsh-CAPNS1-shRNA載體;干擾載體轉(zhuǎn)染Hela細(xì)胞,利用熒光定量PCR檢測CAPNS1mRNA表達(dá)情況;熒光分光光度檢測calpain活性;Western-blot檢測相關(guān)蛋白含量。結(jié)果結(jié)果發(fā)現(xiàn),載體酶切及測序結(jié)果顯示pYr-Lvsh-CAPNS1-shRNA載體構(gòu)建成功;qPCR顯示與對照組相比,shRNA組CAPNS1表達(dá)受到抑制,CAPNS1-sh的干擾效率為50.30%;calpain活性檢測顯示shRNA組calpain活性下降并且CAPNS1、calpain1和calpain2蛋白含量下降。結(jié)論結(jié)果表明pYr-Lvsh-CAPNS1-shRNA載體成功構(gòu)建,并在Hela細(xì)胞中有效干擾CAPNS1表達(dá)。

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