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人GINS2基因RNA干擾慢病毒載體的構(gòu)建及其在上皮性卵巢癌中的表達(dá)

嚴(yán)婷; 葉艾竹; 江恩利; 王玉娟貴州省人民醫(yī)院婦科; 貴州貴陽(yáng)550002; 貴州省人民醫(yī)院檢驗(yàn)科; 貴州貴陽(yáng)550002

摘要：目的構(gòu)建人GINS2基因RNA干擾慢病毒表達(dá)載體,并建立穩(wěn)定干擾GINS2基因表達(dá)的上皮性卵巢癌細(xì)胞系,為研究GINS2蛋白在上皮性卵巢癌發(fā)生發(fā)展中的作用奠定基礎(chǔ)。方法針對(duì)GINS2基因序列,按照RNAi序列的設(shè)計(jì)原則,設(shè)計(jì)、合成GINS2基因特異性小分子干擾siRNA(small interference RNA,siRNA)靶點(diǎn),與慢病毒構(gòu)建重組形成shRNA表達(dá)載體,利用PCR和測(cè)序鑒定獲取正確克隆。將篩選出的最有效重組載體與慢病毒包裝質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞并測(cè)定病毒滴度。隨后將其感染上皮性卵巢癌SKOV3細(xì)胞株細(xì)胞,采用Real-time PCR 檢測(cè)靶基因的沉默效率。結(jié)果慢病毒RNA干擾載體經(jīng)酶切和測(cè)序鑒定證實(shí)準(zhǔn)確連接測(cè)序正確,且包裝出來(lái)的病毒純化后滴度達(dá)5×10^8TU/mL。RT-qPCR、Western blot結(jié)果顯示感染后GINS2 mRNA及蛋白水平顯著下降。結(jié)論成功構(gòu)建了人GINS2基因特異性的慢病毒干擾載體,并獲得了GINS2基因穩(wěn)定干擾的上皮性卵巢癌SKOV3細(xì)胞系。

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