人GINS2基因RNA干擾慢病毒載體的構建及其在上皮性卵巢癌中的表達
摘要：目的構建人GINS2基因RNA干擾慢病毒表達載體,并建立穩定干擾GINS2基因表達的上皮性卵巢癌細胞系,為研究GINS2蛋白在上皮性卵巢癌發生發展中的作用奠定基礎。方法針對GINS2基因序列,按照RNAi序列的設計原則,設計、合成GINS2基因特異性小分子干擾siRNA(small interference RNA,siRNA)靶點,與慢病毒構建重組形成shRNA表達載體,利用PCR和測序鑒定獲取正確克隆。將篩選出的最有效重組載體與慢病毒包裝質粒共轉染293T細胞并測定病毒滴度。隨后將其感染上皮性卵巢癌SKOV3細胞株細胞,采用Real-time PCR 檢測靶基因的沉默效率。結果慢病毒RNA干擾載體經酶切和測序鑒定證實準確連接測序正確,且包裝出來的病毒純化后滴度達5×10^8TU/mL。RT-qPCR、Western blot結果顯示感染后GINS2 mRNA及蛋白水平顯著下降。結論成功構建了人GINS2基因特異性的慢病毒干擾載體,并獲得了GINS2基因穩定干擾的上皮性卵巢癌SKOV3細胞系。
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