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摘要：目的研究低濃度丙烯酰胺(ACR)長期刺激下,銀杏提取物(GBE)調(diào)控小膠質(zhì)細(xì)胞炎性反應(yīng)的分子機(jī)制。方法小膠質(zhì)細(xì)胞取自新生小鼠大腦,采用(0.01~10)mmol/L ACR刺激48 h,用CCK-8法檢測細(xì)胞增殖、免疫熒光細(xì)胞化學(xué)染色法檢測裂解型胱天蛋白酶3(c-caspase-3)確定ACR最優(yōu)濃度為0.1 mmol/L。GBE給藥方法為100 mg/L GBE預(yù)處理2 h。ACR刺激48 h后,免疫熒光細(xì)胞化學(xué)染色法檢測小膠質(zhì)細(xì)胞離子鈣接頭蛋白分子1 (IBA-1)、核因子κB (NF-κB)的表達(dá)及分布情況, Griess反應(yīng)檢測培養(yǎng)液中一氧化氮(NO)水平, ELISA檢測培養(yǎng)液白細(xì)胞介素6(IL-6)、 IL-1β、腫瘤壞死因子α(TNF-α)含量;實(shí)時(shí)定量PCR檢測IBA-1和IL-6、 IL-1β、 TNF-α、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS) mRNA水平,染色質(zhì)免疫共沉淀法檢測p65、核受體相關(guān)蛋白1 (Nurr1)、 RE-1沉默轉(zhuǎn)錄因子共抑制物(CoREST)等轉(zhuǎn)錄因子在炎癥細(xì)胞因子基因啟動子區(qū)域NF-κB結(jié)合位點(diǎn)的結(jié)合程度變化;蛋白免疫共沉淀法檢測Nurr1與CoREST蛋白的相互作用。結(jié)果低濃度ACR長期刺激將靜息態(tài)小膠質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)榧せ顟B(tài),通過NF-κB通路激活I(lǐng)L-6、 IL-1β、 TNF-α基因轉(zhuǎn)錄表達(dá),促使小膠質(zhì)細(xì)胞釋放大量炎癥細(xì)胞因子。GBE預(yù)處理顯著改善小膠質(zhì)細(xì)胞的炎癥態(tài)應(yīng)激,減少其炎癥細(xì)胞因子的釋放。在炎癥細(xì)胞因子基因啟動子區(qū)域的NF-κB結(jié)合位點(diǎn)上, GBE能夠減少招募NF-κB亞單位p65,并增加招募Nurr1-CoREST復(fù)合物以抑制基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)。結(jié)論 GBE通過Nurr1/CoREST反式抑制NF-κB通路,改善小膠質(zhì)細(xì)胞因長期低濃度ACR刺激引發(fā)的炎癥反應(yīng)。

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