銀杏提取物降低丙烯酰胺誘導的小鼠小膠質細胞炎性反應及機制
摘要：目的研究低濃度丙烯酰胺(ACR)長期刺激下,銀杏提取物(GBE)調控小膠質細胞炎性反應的分子機制。方法小膠質細胞取自新生小鼠大腦,采用(0.01~10)mmol/L ACR刺激48 h,用CCK-8法檢測細胞增殖、免疫熒光細胞化學染色法檢測裂解型胱天蛋白酶3(c-caspase-3)確定ACR最優濃度為0.1 mmol/L。GBE給藥方法為100 mg/L GBE預處理2 h。ACR刺激48 h后,免疫熒光細胞化學染色法檢測小膠質細胞離子鈣接頭蛋白分子1 (IBA-1)、核因子κB (NF-κB)的表達及分布情況, Griess反應檢測培養液中一氧化氮(NO)水平, ELISA檢測培養液白細胞介素6(IL-6)、 IL-1β、腫瘤壞死因子α(TNF-α)含量;實時定量PCR檢測IBA-1和IL-6、 IL-1β、 TNF-α、誘導型一氧化氮合酶(iNOS) mRNA水平,染色質免疫共沉淀法檢測p65、核受體相關蛋白1 (Nurr1)、 RE-1沉默轉錄因子共抑制物(CoREST)等轉錄因子在炎癥細胞因子基因啟動子區域NF-κB結合位點的結合程度變化;蛋白免疫共沉淀法檢測Nurr1與CoREST蛋白的相互作用。結果低濃度ACR長期刺激將靜息態小膠質細胞轉變為激活態,通過NF-κB通路激活IL-6、 IL-1β、 TNF-α基因轉錄表達,促使小膠質細胞釋放大量炎癥細胞因子。GBE預處理顯著改善小膠質細胞的炎癥態應激,減少其炎癥細胞因子的釋放。在炎癥細胞因子基因啟動子區域的NF-κB結合位點上, GBE能夠減少招募NF-κB亞單位p65,并增加招募Nurr1-CoREST復合物以抑制基因的轉錄表達。結論 GBE通過Nurr1/CoREST反式抑制NF-κB通路,改善小膠質細胞因長期低濃度ACR刺激引發的炎癥反應。
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