人黃韌帶細胞骨化發生過程中的自噬
摘要：背景:黃韌帶骨化發生的病理機制尚不清楚,臨床上無有效的藥物或非手術治療的方法。目前研究發現,骨 橋蛋白與自噬在成骨過程中均發揮重要作用,二者在黃韌帶骨化中的作用尚不清楚。 目的:通過對骨橋蛋白和自噬在黃韌帶骨化發生機制的研究,嘗試找出藥物治療的潛在作用靶點。 方法:①黃韌帶骨化病、胸椎骨折或單純腰椎間盤突出癥患者行后路全椎板切除減壓獲取黃韌帶,將標本分 為骨化組和非骨化組,每組各取 8 例標本,通過免疫組化染色觀察骨橋蛋白、骨鈣素及自噬指標 Beclin-1、 LC3、P62 的表達;②通過組織塊貼壁法進行黃韌帶細胞的分離培養,并用不同質量濃度的骨橋蛋白干預不 同時間來構建體外黃韌帶細胞骨化模型;③非骨化組黃韌帶細胞用不同濃度的自噬抑制劑 3-甲基腺嘌呤干 預后,再用 100 μg/L 骨橋蛋白誘導,應用 Western blot 檢測骨化指標堿性磷酸酶、骨鈣素的表達變化;④ 用 100 μg/L 骨橋蛋白干預非骨化黃韌帶細胞,并在 0,15,30,60,120 min 終止骨化誘導過程,應用 Western blot 檢測 MAPK 信號通路中重要分子 ERK1/2、JNK、P38 的磷酸化情況;⑤非骨化組黃韌帶細胞 用 ERK1/2 特異的磷酸化阻滯劑 U0126 阻斷 ERK1/2 通路磷酸化后,再用 100 μg/L 骨橋蛋白誘導,應用 Western blot 檢測堿性磷酸酶以及骨鈣素的表達變化。 結果與結論:①骨化黃韌帶和非骨化黃韌帶組織骨鈣素、骨橋蛋白的免疫組化均呈陽性表達;骨化黃韌帶組織 中 Beclin-1 呈陽性表達,而 LC3 及 P62 未見明顯陽性結果;非黃韌帶骨化組織中 Beclin-1、LC3、P62 均呈 陽性表達;②與非骨化組比較,骨化組黃韌帶細胞中堿性磷酸酶和骨鈣素的表達增加;骨橋蛋白可誘導黃韌帶 骨化,骨橋蛋白的作用具有濃度相關性和時間相關性;③自噬強弱與骨化程度呈負相關,即自噬越明顯,骨化 作用越弱;④骨橋蛋白能使 M
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