午夜亚洲国产日本电影一区二区三区,九九久久99综合一区二区,国产一级毛片视频,草莓视频在线观看精品最新

摘要：目的通過使用小干擾RNA(siRNA)降低骨肉瘤中S期激酶相關(guān)蛋白2(Skp2)的表達(dá),探討Skp2對骨肉瘤惡性生物學(xué)行為的影響及其分子機(jī)制。方法轉(zhuǎn)染Skp2 siRNA敲低骨肉瘤U2OS細(xì)胞中Skp2的表達(dá)。通過RT-qPCR和Western blot法檢測細(xì)胞內(nèi)Skp2的mRNA和蛋白表達(dá)水平,確定Skp2 siRNA的沉默效率。MTT法檢測細(xì)胞增殖情況,PI單染及Annexin V/PI雙染后用流式細(xì)胞儀檢測對骨肉瘤細(xì)胞周期及凋亡的影響。Transwell實驗和鈣黃綠素乙酰甲酯(Calcein-AM)染色檢測細(xì)胞的遷移和侵襲。Western blot檢測細(xì)胞內(nèi)Skp2的下游基因p21、p27、p-Akt及E-cadherin的表達(dá)變化。結(jié)果轉(zhuǎn)染Skp2 siRNA在U2OS細(xì)胞中獲得較高的敲除效率。Skp2表達(dá)下調(diào)抑制了骨肉瘤細(xì)胞的增殖,并且使細(xì)胞生長阻滯在G0/G1期,細(xì)胞的凋亡率明顯增加。抑制Skp2后U2OS細(xì)胞的侵襲和遷移能力明顯降低。U2OS細(xì)胞Skp2敲低后其下游調(diào)控分子p21、p27及E-cadherin的表達(dá)顯著升高,而p-Akt的表達(dá)則明顯減弱。結(jié)論 Skp2在骨肉瘤細(xì)胞中發(fā)揮癌基因的作用,通過調(diào)控其信號通路中p21、p27、p-Akt及E-cadherin的表達(dá)影響細(xì)胞生長、周期、凋亡、侵襲和遷移能力等惡性生物學(xué)行為。

注: 保護(hù)知識產(chǎn)權(quán),如需閱讀全文請聯(lián)系腫瘤防治研究雜志社