一種新的血小板活化釋放試驗(yàn)監(jiān)測阿司匹林的治療反應(yīng)
摘要:目的建立一種新的血小板活化釋放試驗(yàn)用于監(jiān)測阿司匹林的治療反應(yīng)。方法采用ARA活化抗凝全血中血小板,應(yīng)用血細(xì)胞分析儀檢測MPC的變化。抽取5名健康志愿者外周血標(biāo)本,取血后迅速混勻,用于MPC、LTAARA和血小板CD62P表達(dá)的檢測,以優(yōu)化檢測條件,包括ARA活化濃度(分別為0、0.5、1.0、1.5、5.0、10.0mmol/L)的選擇和ARA活化血小板時間的選擇(37℃水浴中5、10、20、30、40、50、60、70、80、90min);評價該方法的穩(wěn)定性(取血后0、1、2、3h分別檢測)、重復(fù)性(MPC、LTAARA、血小板CD62P表達(dá)的檢測分別重復(fù)測定10次,計(jì)算批內(nèi)及批間CV);并通過體外乙酰水楊酸試驗(yàn)驗(yàn)證該方法監(jiān)測阿司匹林治療反應(yīng)的可行性。ARA活化血小板后用CD曠PerCP和CD62P-PE標(biāo)記,流式細(xì)胞儀測定CD62P,表達(dá)陽性的血小板百分率,對MPC與CD62P的相關(guān)性進(jìn)行分析。選擇口服阿司匹林至少7d的患者為服藥組,共93例;選擇未口服或停止口服阿司匹林7d以上的患者為對照組,共100例。用該方法檢測服藥組與對照組患者ARA(終濃度0.5mmol/L)活化前后MPC的變化,并與LTAARA方法進(jìn)行比較,評價該方法的準(zhǔn)確性。結(jié)果ARA終濃度為0.5mmol/L時,血小板活化充分,MPC與血小板膜表面CD62P呈負(fù)相關(guān)(r=-0.755,P〈0.01)。37℃水浴活化30min后MPC達(dá)到穩(wěn)定,取血后室溫3h內(nèi)MPC保持穩(wěn)定,新鮮全血MPC的批內(nèi)CV為1.35%,固定質(zhì)控全血批間CV為0.71%和0.74%。隨著全血中乙酰水楊酸濃度升高(0~6.95μmol/L),ARA活化血小板后MPC逐漸升高,CD62P逐漸減低,二者呈負(fù)相關(guān)(r=-0.765,P〈0.01)。服藥組MPC差值為(8.2±8.6)g/L,MPC變化率為(3.4±3.6)%,對照組分別為(37.4±10.3)g/L、(15.7±4.0)%,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=21.522、22.409,P均〈0.01)。MPC變化率ROC曲線下面積為0.
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