線粒體ALDH2對高糖處理的乳鼠心肌成纖維細胞中自噬相關蛋白影響
摘要：目的探討自噬是否介導乙醛脫氫酶(ALDH)2對高糖處理的乳鼠心肌成纖維細胞的作用。方法無菌條件下取出生3d內SD大鼠乳鼠心臟,剪碎并用胰蛋白酶和膠原酶2混合酶消化成單個細胞,經差速貼壁后并傳代培養,當傳至3代時進行處理。應用免疫熒光檢測培養的乳鼠心肌成纖維細胞內波形蛋白以此鑒定原代培養心肌成纖維細胞純度;實驗涉及如下分組:5.5 mmol/L糖對照組(F)、30 mmol/L高糖組(FH)、30 mmol/L高糖加乙醛脫氫酶2激動劑(Alda-1)組(FHA)、30 mmol/L高糖加乙醛脫氫酶2抑制劑(Daidzin)組(FHD)、30 mmol/L高糖加乙醛脫氫酶2激動劑(Alda-1)和乙醛脫氫酶2抑制劑(Daidzin)(FHAD);Western blot檢測ALDH2、微管相關蛋白1輕鏈3B亞基(LC3B)、Beclin-1的蛋白表達;羥脯胺酸試劑盒測定細胞培養液中羥脯胺酸含量;CCK-8試劑盒測定心肌成纖維細胞增殖能力。結果與F組相比,FH組ALDH2蛋白表達降低,Beclin-1、LC3B蛋白表達降低,細胞培養上清液內羥脯胺酸含量、細胞數目增高;與FH組相比,FHA組Beclin-1、LC3B蛋白表達、ALDH2蛋白表達增加,細胞數目、細胞內羥脯胺酸含量降低,與此同時FHD組ALDH2蛋白及Beclin-1、LC3B表達降低,細胞數目、細胞內羥脯胺酸含量增高。結論線粒體ALDH2抑制高糖誘導的乳鼠心肌成纖維細胞增殖作用,其機制可能與ALDH2對自噬相關蛋白Beclin-1、LC3B的上調作用有關。
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