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摘要：目的探討自噬是否介導(dǎo)乙醛脫氫酶(ALDH)2對高糖處理的乳鼠心肌成纖維細(xì)胞的作用。方法無菌條件下取出生3d內(nèi)SD大鼠乳鼠心臟,剪碎并用胰蛋白酶和膠原酶2混合酶消化成單個細(xì)胞,經(jīng)差速貼壁后并傳代培養(yǎng),當(dāng)傳至3代時進(jìn)行處理。應(yīng)用免疫熒光檢測培養(yǎng)的乳鼠心肌成纖維細(xì)胞內(nèi)波形蛋白以此鑒定原代培養(yǎng)心肌成纖維細(xì)胞純度;實(shí)驗(yàn)涉及如下分組:5.5 mmol/L糖對照組(F)、30 mmol/L高糖組(FH)、30 mmol/L高糖加乙醛脫氫酶2激動劑(Alda-1)組(FHA)、30 mmol/L高糖加乙醛脫氫酶2抑制劑(Daidzin)組(FHD)、30 mmol/L高糖加乙醛脫氫酶2激動劑(Alda-1)和乙醛脫氫酶2抑制劑(Daidzin)(FHAD);Western blot檢測ALDH2、微管相關(guān)蛋白1輕鏈3B亞基(LC3B)、Beclin-1的蛋白表達(dá);羥脯胺酸試劑盒測定細(xì)胞培養(yǎng)液中羥脯胺酸含量;CCK-8試劑盒測定心肌成纖維細(xì)胞增殖能力。結(jié)果與F組相比,FH組ALDH2蛋白表達(dá)降低,Beclin-1、LC3B蛋白表達(dá)降低,細(xì)胞培養(yǎng)上清液內(nèi)羥脯胺酸含量、細(xì)胞數(shù)目增高;與FH組相比,FHA組Beclin-1、LC3B蛋白表達(dá)、ALDH2蛋白表達(dá)增加,細(xì)胞數(shù)目、細(xì)胞內(nèi)羥脯胺酸含量降低,與此同時FHD組ALDH2蛋白及Beclin-1、LC3B表達(dá)降低,細(xì)胞數(shù)目、細(xì)胞內(nèi)羥脯胺酸含量增高。結(jié)論線粒體ALDH2抑制高糖誘導(dǎo)的乳鼠心肌成纖維細(xì)胞增殖作用,其機(jī)制可能與ALDH2對自噬相關(guān)蛋白Beclin-1、LC3B的上調(diào)作用有關(guān)。

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