Annexin A2單克隆抗體抗腫瘤活性的實驗研究
摘要：目的研究人膜聯蛋白A2(Annexin A2)單克隆抗體的抗腫瘤活性,探討Annexin A2在腫瘤發生發展中的作用。方法表達純化Annexin A2重組蛋白,免疫小鼠及細胞融合制備單克隆抗體,用間接ELISA檢測抗體的效價,Western blot和免疫共沉淀檢測抗體的特異性。MTT法檢測外源性Annexin A2抗體對腫瘤細胞生長的影響,流式細胞術檢測其對腫瘤細胞周期的影響,RT-PCR及Quantitative real-time PCR檢測對腫瘤細胞周期相關基因的影響,transwell檢測其對HepG2細胞的侵襲及遷移的影響。結果 Annexin A2重組蛋白免疫小鼠,獲得效價高的單克隆抗體。MTT結果顯示,與對照細胞相比,外源抗體能夠抑制HepG2細胞的生長。細胞周期相關檢測結果顯示,Annexin A2蛋白的表達與腫瘤細胞的生長周期相關基因具有相關性。transwell結果顯示,外源抗體的處理抑制HepG2細胞的遷移,但促進了HepG2細胞的侵襲。結論 Annexin A2重組蛋白免疫Balb/c小鼠后,獲得高滴度特異性的單克隆抗體。獲得的Annexin A2單克隆抗體具有抑制生長遷移作用,為腫瘤的診斷及治療提供了實驗依據。
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