錨定表達(dá)豬IFN-λ3重組植物乳桿菌的構(gòu)建及其抗PEDV效果的檢測(cè)
摘要:為構(gòu)建錨定表達(dá)豬IFN-λ3的重組植物乳桿菌(L.plantarum),并驗(yàn)證其抗病毒活性,本研究將豬IFN-λ3基因插入大腸桿菌-乳酸菌穿梭錨定表達(dá)載體pSIP-409-pgsA'中構(gòu)建重組質(zhì)粒pSIP-409-pgsA'-IFN-λ3,將其電轉(zhuǎn)化至植物乳桿菌NC8中獲得重組pSIP-409-pgsA'-IFN-λ3/L.plantarum。經(jīng)清酒乳桿菌素(SPPIP)誘導(dǎo)后用His標(biāo)簽單克隆抗體經(jīng)westernblot、間接免疫熒光檢測(cè)目的蛋白的錨定表達(dá)情況。結(jié)果顯示,豬IFN-λ3在重組植物乳桿菌表面錨定表達(dá)。利用重組菌刺激細(xì)胞后通過(guò)熒光定量PCR測(cè)定IPEC-J2/PEDV系統(tǒng)中豬流行性腹瀉病毒(PEDV)載量,并檢測(cè)該重組菌刺激細(xì)胞后干擾素刺激基因(ISGs)的相對(duì)轉(zhuǎn)錄水平。結(jié)果顯示,該重組菌能夠顯著抑制PEDV在IPEC-J2中的復(fù)制,并能誘導(dǎo)細(xì)胞中ISGs(OASL、IFITMs)的高轉(zhuǎn)錄水平,具有抗病毒作用。本研究為PEDV的預(yù)防和治療提供可行方案。
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