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錨定表達豬IFN-λ3重組植物乳桿菌的構(gòu)建及其抗PEDV效果的檢測

劉永仕; 劉瓊; 趙唯; 黃海斌; 石春衛(wèi); 姜延龍; 楊桂連; 王春鳳 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院/吉林省動物微生態(tài)制劑工程研究中心; 吉林長春130118

摘要：為構(gòu)建錨定表達豬IFN-λ3的重組植物乳桿菌(L.plantarum),并驗證其抗病毒活性,本研究將豬IFN-λ3基因插入大腸桿菌-乳酸菌穿梭錨定表達載體pSIP-409-pgsA'中構(gòu)建重組質(zhì)粒pSIP-409-pgsA'-IFN-λ3,將其電轉(zhuǎn)化至植物乳桿菌NC8中獲得重組pSIP-409-pgsA'-IFN-λ3/L.plantarum。經(jīng)清酒乳桿菌素(SPPIP)誘導(dǎo)后用His標(biāo)簽單克隆抗體經(jīng)westernblot、間接免疫熒光檢測目的蛋白的錨定表達情況。結(jié)果顯示,豬IFN-λ3在重組植物乳桿菌表面錨定表達。利用重組菌刺激細胞后通過熒光定量PCR測定IPEC-J2/PEDV系統(tǒng)中豬流行性腹瀉病毒(PEDV)載量,并檢測該重組菌刺激細胞后干擾素刺激基因(ISGs)的相對轉(zhuǎn)錄水平。結(jié)果顯示,該重組菌能夠顯著抑制PEDV在IPEC-J2中的復(fù)制,并能誘導(dǎo)細胞中ISGs(OASL、IFITMs)的高轉(zhuǎn)錄水平,具有抗病毒作用。本研究為PEDV的預(yù)防和治療提供可行方案。

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