人肝臟MST1相關miRNA的篩選、質粒構建與驗證
摘要：目的構建與人肝臟絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶4(MST1)表達相關的人源性miRNAs(hsa-miRNAs)的重組質粒并進行初步驗證,為深入探討其在肝臟脂代謝途徑中的可能作用奠定基礎。方法通過TargetScan、miRDB等數據庫并參照文獻提供的數據庫信息篩選出可能靶向人肝臟MST1的脂肪組織來源miRNAs,并通過Westernblot和雙熒光素酶報告基因實驗進行篩選;進而改建miRNAs過表達載體骨架,并將篩選得到的miRNAs構建過表達載體,獲得miRNA的過表達重組質粒;采用棕櫚酸(PA)孵育人肝癌細胞株HepG2構建非酒精性脂肪肝(NAFLD)細胞模型,并驗證miRNAs對NAFLD細胞模型內MST1表達的調控效應。結果成功篩選出了靶向人肝臟MST1的miRNA:hsa-miR-448和hsa-miR-518a-3p,并構建了miRNAs過表達載體,在NAFLD細胞模型中驗證了hsa-miR-448和hsa-miR-518a-3p過表達對脂代謝的影響。結論初步篩選并驗證了調節人肝臟MST1表達的人源性miRNAs。證實hsa-miR-448和hsa-miR-518a-3p過表達通過下調MST1及相關信號通路的關鍵蛋白進而影響NAFLD的進程。
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