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EvaGreen多重?zé)晒釸T-PCR結(jié)合熔解曲線分析同時檢測3種呼吸道病毒

王琪; 黃翩翩; 賈曉蕓; 徐金花; 方海榮; 周小堅; 蘇影; 莫秋華 珠海生碼醫(yī)學(xué)檢驗有限公司; 廣東珠海519000; 珠海市婦幼保健院; 珠海國際旅行衛(wèi)生保健中心

摘要：目的建立能同時檢測甲型流感病毒（Flu-A）、乙型流感病毒（Flu-B）和鼻病毒（HRV）的Eva Green多重?zé)晒釸T-RCR熔解曲線分析方法。方法針對Flu-A的M基因、Flu-B的NS1基因、HRV的5’NCR設(shè)計檢測引物,并使3個基因擴(kuò)增產(chǎn)物的解鏈溫度（Tm值）相差≥1.5℃。采用Eva Green新型熒光染料,通過優(yōu)化反應(yīng)條件建立一步法多重RT-PCR反應(yīng)體系。通過與商品化的熒光RT-PCR試劑盒的對照試驗,對新建方法進(jìn)行性能驗證。結(jié)果 3種病毒的PCR產(chǎn)物均獲得特異性的熔解曲線峰,Tm值范圍分別為：Flu-A,85.0～85.5℃;Flu-B,82.5～83.0℃;HRV,88.5～89.5℃,可以通過T_m值差異明顯區(qū)分3種病毒。100份臨床樣本的性能驗證顯示,新方法對3種病毒的檢測均有較高的靈敏度、特異性和檢驗效能。結(jié)論針對3種常見呼吸道病毒建立了基于Eva Green結(jié)合熔解曲線分析的多重?zé)晒釸T-PCR方法。該方法簡便實用、成本低廉,為喘息性疾病的臨床診斷和病原譜研究奠定了方法學(xué)基礎(chǔ)。

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