科特迪瓦型埃博拉病毒實時熒光PCR方法的建立
摘要：目的建立科特迪瓦型埃博拉病毒實時熒光PCR檢測方法,并在廣東口岸進行應用。方法分析埃博拉病毒基因組的同源性,設計3組引物和探針用于科特迪瓦型埃博拉病毒核酸檢測。對不同濃度的科特迪瓦型埃博拉病毒體外轉錄RNA進行檢測,確定最佳的引物和探針組合、用量,以及Mg2＋用量,建立科特迪瓦型埃博拉病毒實時熒光PCR方法。對建立的方法進行靈敏度、特異性和靈敏度分析,并用于廣東口岸非洲入境發熱人員血清樣本的篩查。結果經篩選,引物Ebv-C-3F/Ebv-C-3R和探針Ebv-C-3P對102～105拷貝/ml的陽性質粒的檢出率為100.0%,是最佳的引物和探針組合。優化后的實時熒光PCR體系中引物和探針終濃度分別為400 nmol/L和80 nmol/L,Mg2＋終濃度為2 mmol/L。方法的靈敏度為50拷貝/ml,重復性好、特異性強,對扎伊爾型、蘇丹型、本迪布焦型和萊斯頓型埃博拉病毒陽性對照樣本、馬爾堡病毒陽性對照樣本和廣東口岸非洲發熱入境人員血清樣本檢測均為陰性。結論建立的科特迪瓦型埃博拉病毒實時熒光PCR檢測方法靈敏度高,特異性強,重復性好,對于境外輸入性埃博拉病毒病病例的早期診斷和分型鑒別具有重要意義。
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